植物生物反应器.ppt

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1、植物转基因生物反应器人角质细胞生长因子转化胡萝卜和水稻1植物反应器概述植物生物反应器定义优点：（1）蛋白翻译后正确修饰、加工，（2）生产成本低，（3）生产工艺简单，（4）存储、使用简单方便，（5）使用安全。角质细胞生长因子概述（1）角质细胞生长因子(keratinocytegrowthfactor,KGF)是1989年由Rubin等首先从人胚胎肺成纤维细胞的生长培养液中分离出来的。是成纤维细胞生长因子家族的成员之一。（2）KGF基因编码一有194个氨基酸的蛋白质。基因含有三个外显子和两个内含子。（3）

2、KGF是由间充质来源的细胞产生的，通过旁分泌途径特异地作用于上皮细胞。（4）KGF具有很强的促上皮细胞分裂的功能。角质细胞生长因子的生物学功能KGF在生长发育中器官的分化、形成中起重要作用1、肺表皮细胞的生长、分化和成型及肺的分支形成中起着重要的作用。2、动物的精囊发生。损伤修复功能及减少化疗的损伤1、皮肤损伤修复，2、肠胃损伤的修复，3、减少放化疗的伤害。以胡萝卜、水稻为植物反应器表达KGF的意义首先，具有植物反应器的优点胡萝卜（1）营养丰富（2）营养保健品食用含KGF的胡萝卜可以辅助治疗肠胃疾病，

3、药敷则可加快皮肤伤口的愈合。因此在胡萝卜中表达高活性的KGF将具有重要的商业价值。水稻(1)美容保健品(2)“米疗”在水稻中表达人KGF，这无疑给水稻这位美容新秀更添一“亮点”，即使用萃取的水稻精华及水稻中表达的人KGF可以在对皮肤进行保养的同时加快伤口、疤痕的修复，角质细胞更新。技术流程角质细胞生长因子的核苷酸序列的获得植物水稻、胡萝卜表达体系的建立筛选培养基上抗性苗的获得农杆菌介导的转化检测植物表达载体的构建共培养，筛选出抗性愈伤GUS检测PCR检测SouthernbottingRT-PCR检测W

4、esternbotting角质细胞生长因子的核苷酸序列的获得重叠延伸PCR方法获得角质细胞生长因子编码序列1）重叠延伸PCR介绍2）外显子2、3的获得外显子2：2号引物：5’-GAAGAATAATTACAATATCATGGAAATCA-3’3号引物：5’-TGCATTCTTTCTTTGCATAGAGTTT-3’外显子3：4号引物5’-CTATGCAAAGAAAGAATGCAATGAA-3’3’(3)引物5’-GAATTCTTAAGTTATTGCCATAGGAAG-3’用人肺组织块提取的DNA为模板，P

5、CR获得相应的外显子序列。外显子1的获得1号引物5’-GATTTCCATGATATTGTAATTATTCTTCA-3’Ⅰ5’-GGCGGATCCTCTAGAATGTGCAATGACATGACTCCAGAGCAAATGGCTACAAATGTGAA-3’Ⅱ5’-TCCATGTAATCATAACTTCTTGTGTGTCGCTCAGGGCTGGAACAGTTCACATTTGTAGC-3’Ⅲ5’-ATGATTACATGGAAGGAGGGGATATAAGAGTGAGAAGACTCTTCTGTCGAACACAGTG

6、G-3’Ⅳ5’-GGGTCCCTTTTACTTTGCCTCTTTTATCGATCCTCAGGTACCACTGTGTTCGACAG-3’Ⅴ5’-CAAAGTAAAAGGGACCCAAGAGATGAAGAATAATTACAATATCATGGAAATCAGGAC-3’图1、外显子1核苷酸获得图示KGF全长的获得图图2KGF序列获得图示KGF三段外显子及全长的凝胶电泳图图3、PCR产物凝胶电泳图MDNAmarkerDL20001外显子1,2外显子2,3外显子34阴性对照图4、KGF核苷酸凝胶电泳图M、DNAm

7、arkerDL2000,1、KGF片段外显子1为193bp的核苷酸片断，外显子2为104bp的核苷酸片断，外显子3为192bp的核苷酸片断，总长为500bp左右。经凝胶电泳后，与预期的大小一致。获得序列的测序结果BamHIXbalIEcoRIGGATCCTCTAGAGATTGAATTCTTAAGTTATTGCCATAGGAAGAAAGTGGGCCGTTTTTTGTTCTTTCTTCGTTTTCTTCCCTTTGACAGGAAGCCCCTTTTGATTTAAGGCCACGAACATTTCCCCTCCGC

8、TGTGTGTCCATTTAGCTGATGCATAGGTGTTGTAATGGTTTTCCAGAATCAGTTCTTTGAAGTTGCAATCTTCATTGCATTCTTTCTTTGCATAGAGTTTCCCTTCTTTGTTCATGGCAAGATAGTATTCACTTTCCACCCCTTTGATTGCCACAATTCCAACTGCCACAGTCCTGATTTCCATGATATTGTAATTATTCTTCATCTCTTGGGTCCCTTTTACTTTGCC