生物显微技术ppt课件.ppt

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1、制片技术是生物科学中必不可少的研究手段，在生物科学的领域中占有重要的地位，现在已经成为生物学工作者必须掌握的一门技术。生物制片技术简单地说就是要利用各种方法将生物体或者组织、器官制成适合于显微镜下观察的薄片，并要显示出清晰的显微结构的一门技术。第五章生物显微制片技术一、生物制片的分类根据所制成片子保存时间的长短分类:临时制片永久制片根据其制作的方法分类：活体观察切片法非切片法1、活体观察活体观察是将生物体的个体或者其一部分，就其生活状态置于载玻片上加一滴水和盖玻片或放置于培养皿中直接进行镜检，从而达到预定的检查目的优点：简便省时；可观察到活体的情况；不需要什么特殊设备。缺点：未经其它处理，材

2、料或者过厚阻碍光线通过，或者无色透明难以区分，结果不能令人满意。2、切片法切片法是利用锋利的刀具(简单的刀片或复杂的切片机）将材料切成薄片徒手切片法(freehandsection)滑走切片法(slidingsection)火棉胶切片法(celloidinmethod)冰冻切片法(freezingmethod)石蜡切片法(paraffinmethod)超薄切片法(电镜切片法)(electronmicroscopicsectionmethod)振动切片法徒手切片法利用刀片或有柄剃刀徒手将材料切成薄片后置于载玻片上进行活体观察，或经过一系列药品处理，制成永久片子。此法常做临时制片，必要时也可作成

3、永久制片。方法简便、快速，要求设备简单。徒手切片技术要求熟练，才能切出符合要求的薄片，切片厚度为20-25um。切取的标本材料和夹持物滴水放置标本加盖盖玻片叶的横切徒手切片法蓖麻茎厚角组织和花青素，未染色徒手切片法示海桐花嫩茎初生结构滑走切片法滑走切片法(slidingsection)：是用滑走切片机进行切片，可以获得一定厚度、完整和均匀的切片，主要用于切一些硬质材料（如木本茎、枝条、骨质等），不需要包埋的过程，但也可以切包埋的材料。切片厚度为1-25um。德国Leica公司SM2000R滑走切片机滑走切片法锦鸡儿的次生木质部，番红染色火棉胶切片法火棉胶切片法是利用火棉胶作包埋剂，使组织材料

4、包埋在火棉胶中，再行切片的方法。火棉胶易溶于酒精和乙醚的等量混合液，其溶液不溶于氯仿（包括含有氯仿的混合液），遇氯仿即变硬，利用这一性质，经固定的材料，脱水后，浸入由等量酒精和乙醚配制的火棉胶溶液中透胶、包埋、再置于氯仿中使其硬化，制成包埋块，便可行切片、染色等步骤。火棉胶切片法与石蜡切片法相比较，能减少组织收缩，但是所需时间较长及制成连续切片手续麻烦。冰冻切片法冰冻切片法是将已固定或新鲜的组织块不经脱水先进行冰冻，然后在切片机上进行切片的一种方法。冰冻切片法具有手续简单、制片速度块并能完整保存细胞结构及生物大分子活性（如脂肪、酶等）的特点，常用于临床上的病理快速诊断及原位杂交或细胞化学的制

5、片。切片厚度为10-50um。德国LeicaCM3050S冰冻切片机石蜡切片法石蜡切片法是动物、植物和病理组织切片制作上最重要、最常用的一种方法。石蜡切片法就是将材料经过各种处理，包埋于石蜡中，然后在切片机上切成薄片，最后制成永久制片一般的材料都可以使用石蜡切片法（除了藻类、菌类、木材外），它既可以制成较薄的切片，使材料各部分清晰可见，同时也可制连续切片，观察材料的动态发生及层次。切片厚度为5-15um。石蜡切片法洋葱根尖细胞有丝分裂，铁矾-苏木精染色石蜡切片法花生老根横切面，番红-固绿双重染色石蜡切片法南瓜茎横切面，番红，固绿和橘红G三重染色小白鼠肝脏细胞石蜡切片法莴苣瘦果石蜡切片横切面3

6、、非切片法所谓非切片法，是指不经过切片手续而作成制片的方法。它与活体观察的区别在于：非切片法常常经过药剂或染色剂的处理，这样组织被杀死后经过染色可作成临时或者永久制片。分类：整体制片法（整体封藏法）：昆虫口器、浮游动物、花粉粒涂片法：血液、粪便伸展法：皮下结缔组织、肠系膜磨片法：牙齿、耳石、贝壳压片法：根尖、果蝇唾液腺离析法（组织分离法）：木材纤维（铬酸－硝酸）、肌纤维（KOH-HNO3）整体封固（装片）法整体封固法就是不必经过切片手续而将整个微小的或透明的生物体或器官封藏起来，制成整体装片的方法。适用于一些小型或者扁平的材料，如单细胞、丝状或叶状的藻类、菌类或蕨类的原叶体、孢子囊、纤细的苔

7、藓植物，种子植物的花粉粒和表皮、幼胚以及其他幼小的器官，原生动物、蠕虫、昆虫的幼胚等不必经过切片手续，就可以显示生物体或生物器官的整体。优点：是能明显地表现出其器官的全部特性；缺点：是由于生物的整体有的是几层细胞，比较厚，不容易看清楚。整体封固法的分类：根据所用的脱水剂、透明剂和封固剂的不同而有多种方法，包括有甘油法、甘油冻胶法、甘油－二甲苯法、松节油法、叔丁醇树胶法、二氧六环树胶法等。整体封固法茄叶表皮毛和