冰冻切片免疫荧光染色步骤.doc

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1、冰冻切片免疫荧光染色步骤：（1）冰冻切片取出，室温放置使其干燥后，用冷丙酮于4℃固定10分钟。（2）切片用0.01MPBS清洗后加入1.2%双氧水作用30分钟，以除去非特异染色。（3）0.01MPBS清洗，3次×10分钟。（4）0.3%TritonX-100作用30分钟。（5）加入以抗体稀释液（含1%BSA的0.01MPBS，pH7.4）稀释至工作浓度的一抗，4℃过夜。（6）0.01MPBS清洗，3次×10分钟。（7）加入荧光抗体TRITC-IgG（1：100）或FITC-IgG（1：100），室温孵育2小时。（8）0.01MPBS清洗，3次×10分钟。（9）缓冲甘油封片

2、，荧光显微镜下观察。对照组：采用空白对照：除用0.01MKPBS代替一抗外，其余程序与实验组相同。载玻片处理步骤：（1）硫酸浸泡过夜。（2）自来水冲洗干净后双蒸水冲洗3遍。（3）晾干后在0.1%明胶中快速浸泡后取出。室温晾干或37℃烤干备用。