农药小分子与DNA作用光谱法.docx

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1、一实验意义农药的使用在给农业带来巨大经济效益的同时，其负面效应也日益突出，尤其是农药对食品和环境的污染，并通过生物富集和食物链的传递进入人体，可造成农药残留在人体内蓄积，进而引起各种组织器官发生病变，甚至致癌、致畸、致突变，农药残留问题已成为当今食品安全最主要的问题之一。DNA是生物体内主要的遗传物质，也是化学物质作用于生物体早期阶段的一个重要的靶标。药物分子与DNA之间的相互作用模式主要有嵌插结合、沟槽结合和静电结合，其中嵌插结合是形成DNA加合物最主要的模式，DNA加合物的形成一旦逃避生物自身的修复，就可成为致突变或致癌的最小因子而

2、被认为是致肿瘤过程的一个重要起始阶段。事实证明，在体内与DNA发生作用的化学物质都能在一定程度上在体外与DNA发生作用。具有选择性的沟槽结合和嵌插作用是药物分子与DNA相互作用研究的重点[1]。荧光分析法和吸收光谱法是一种最常用的分析方法，这方面的工作有更多的文献报道[2]。溴化乙锭(EB)是一种研究DNA的最灵敏的荧光探针之一，关于它们与DNA的键和特性已有详尽的报道，水溶液中EB的荧光量子产率小，当键合到DNA上后，其荧光强度增强，且其激发波长有明显的红移。EB已作为一种典型的平面嵌入剂，用来对比讨论各种荧光分子与DNA的作用方式。

3、通过荧光光谱等研究农药小分子与DNA的相互作用，求得了结合常数，取得了相关信息，从分子水平上探讨了其作用方式。二研究现状及发展趋势2.1研究现状相互作用分析的研究目前在国内外都是较为热门的课题，所采用的研究手段主要有：光谱分析、波谱分析、表面等离子体激元共振(SPR)、电化学分析拍j、亲和毛细管电泳分析{72(ACE)、原子力显徽镜(AFM)法、量热法等仪器分析方法。其中的光谱法包括荧光分光光度法、紫外可见分光光度法、红外光谱法、圆二色光谱法、拉曼光谱法、x射线衍射等。汪佳蓉，张国文等［1］采用紫外-可见光谱法、荧光光谱法并结合溴化乙锭

4、(EB)荧光探针、黏度测定、盐效应、磷酸盐效应和KI荧光猝灭实验，研究倍硫磷（有机磷杀虫剂）与小牛胸腺DNA的相互作用。结果发现，DNA对倍硫磷内源性荧光产生强烈的猝灭作用。李来生[2]等采用阿霉素荧光探针研究水溶性对一二甲氨甲基一杯芳烃与小牛胸腺DNA相互作用。实验发现：DNA能猝灭阿霉素的荧光。杯幅1胺能与DNA的磷氧负离子强烈作用，并以嵌入与静电位点竞争混合模式影响DNA一阿霉素。宫霞[3]等利用荧光光谱方法，以溴化乙锭(EB)荧光探针研究家蝇幼虫抗菌肽MDL一1与大肠杆菌染色体DNA的相互作用，探讨其作用模式为沟槽式和嵌入式混合

5、模式。并计算出其结合常数和成键位点数。郑朝华[4]等利用荧光光谱法，研究左氧氟沙星与DNA间的相互作用模式。小牛胸腺DNA对左氧氟沙星的荧光具有强烈的猝灭作用。经计算得出结合常数和结合位点数，并推断两者之间为沟槽作用模式。张勇[5]等采用荧光光谱法，利用血卟呤及金属血卟啉对甲氧卞氨嘧啶的识别作用，建立起灵敏的血卟啉分析方法，并求得结合常数和结合位点数。2.2发展趋势药物的荧光分析法[6]进展：常用的药物分析方法有重量分析法、滴定分析法、色谱分析法（包括柱色谱法、纸色谱法、薄层色谱法、离子交换色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、固相微萃取

6、、高效毛细管电泳等）、光化学分析法（包括红外和紫外可见分光光度法、荧光光谱法、化学发光法、磷光分析法、原子吸收光谱法、质谱法、共振光散射等）、电化学分析法等荧光法以其灵敏度高、选择性好、操作简便等优点受到分析工作者的青睐将荧光光谱分析法应用于药物分析，已在药物有效成分分析鉴定、药物代谢动力学研究、临床药理与药效分析等方面取得长足发展，并广泛应用于生化分析、生物医学、临床分析等领域的痕量分析。常规荧光分析法最早被应用于分析抗疟疾药物奎宁，随着荧光分析法的发展，其应用范围日益扩大，被广泛用于抗菌素药物、止痛药、镇静剂、止血药等的分析，涉及合

7、成药物、生物药物和天然药物，由于自身具有发射荧光特性的物质相对较少，并且受到拉曼峰和散射光等背景的干扰，常规荧光分析法在药物分析中的应用受到限制，为使荧光分析法的应用更加广泛，发展了各类荧光分析方法，如对不发荧光的物质可通过某类化学反应使其转变为适合测定的荧光物质，对荧光较弱的物质可采取荧光增敏分析法，近年来，还发展了各种新型荧光分析技术，如激光诱导荧光法、同步荧光法、导数荧光法、荧光探针法、光化学荧光法、时间分辨荧光法、三维荧光法、偏振荧光法、荧光免疫测定法、荧光成像技术、荧光光纤传感器等，这些技术的应用加速了各种新型荧光分析仪器的研

8、制，使荧光分析不断朝着高效、痕量、微观和自动化方向发展。随着药学学科的发展，人们对药物分析的要求越来越高，因此必须运用和发展更适当的分析方法来满足药物分析的要求!今后的发展方向是：探索并提出常规药物荧光分析