DB36∕T 1036-2018 芝麻细菌性青枯病诊断及检测技术规程.pdf

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1、ICS65.020.20B15DB36江西省地方标准DB36/T1036-2018芝麻细菌性青枯病诊断及检测技术规程TechniquelyRulesforDiagnosisandDetectionofSesameBacterialWilt[RalstoniasolanacearumSmith]2018-07-03发布2019-01-04实施江西省质量技术监督局发布DB36/T1036-2018目次前言................................................................................II1范围..........

2、....................................................................12术语和定义........................................................................13症状诊断..........................................................................14病原菌形态学鉴定与致病性测定......................................................

3、15病原菌PCR检测....................................................................2附录A（资料性附录）培养基配制方法..................................................3附录B（资料性附录）PCR检测引物、反应体系条件......................................4IDB36/T1036-2018前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由江西省农业厅提出并归口。本标准起草单位：江西省农业科学院植物保护研究所、江西生物

4、科技职业学院。本标准主要起草人：华菊玲、李信申、黄小梅、刘清兰、熊艳、黄瑞荣、王希、史建苗、盛琦、饶喜。IIDB36/T1036-2018芝麻细菌性青枯病诊断及检测技术规程1范围本标准规定了芝麻细菌性青枯病（Sesamebacterialwilt）诊断及检测技术的术语和定义、症状诊断、病原菌形态学鉴定与致病性测定和病原菌PCR检测。本标准适用于芝麻细菌性青枯病症状诊断、病原菌形态学鉴定及PCR检测。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.116srRNA序列细菌染色体上编码rRNA相对应的DNA序列，存在于所有细菌的染色体基因组中。具有高度的保守性和特异性。16srRNA基因检测技术

5、已成为病原细菌检测和鉴定的重要方法。2.2ITS序列16S～23SrRNA基因区间的一段高度可变序列，该区域种间多态性丰富，而种内却非常保守，这些特点使得它在细菌分类鉴定研究上具有独特的优势。3症状诊断初期在茎杆上出现暗绿色水浸状斑块，继而呈黑褐色条斑向上下扩展，顶梢常有2个～3个梭形溃疡状裂缝，部分病茎溃疡状裂缝可延伸至茎杆中下部，溃疡状裂缝出现早而多的病株常呈畸形。病株顶端先出现萎蔫，继而整株呈失水状，早期夜间可恢复正常，后期则呈黑褐色枯死。病株茎部维管束变褐色，髓部空洞。折断茎杆常可见菌脓形成的透明细丝。茎杆表皮下常可见泡状隆起，刺破后有乳白色菌脓溢出，渐成为漆黑色晶亮的颗粒。4病

6、原菌形态学鉴定与致病性测定4.1菌株分离与形态学鉴定4.1.1菌株分离采集典型的芝麻细菌性青枯病标本，剪取病健交界处病茎3cm～4cm，经75%酒精消毒、灭菌水冲洗后，剪去两头取中间段置于装有5ml～10ml无菌水的试管中静置5min左右至悬浮液变混浊，用接种环蘸1DB36/T1036-2018取少量粗悬液分别在NA平板和TZC平板上划线或涂布。28℃培养72h后观察菌落形态。挑取典型菌落，进行光学显微镜下菌体的革兰氏染色、鞭毛染色和形态观察。4.1.2形态学鉴定根据以下形态学特征作为鉴定依据。青枯菌革兰氏染色反应为阴性，菌体杆状，具1根～4根极鞭，无荚膜。在NA培养基平板上于28℃培养

7、72h，见附录A，菌落呈污白色，平滑有光泽，呈粘液状，直径2mm～3mm。在2,3,5-氯化三苯基四氮唑（简称TZC，下同）选择性培养基上，28℃培养72h，产生的菌落呈不规则圆形，具流动性，中心呈红色至桔红色，边缘为白色，菌落直径2mm～5mm。4.2菌株致病性测定4.2.1接种体制备8将形态学鉴定为青枯菌(R.solanacerum)的菌株于NA平板上培养活化48h后，配成1×10CFU/ml菌悬液供接种备用。4.2.2接种期芝