生化提取实验讲义

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1、生化制药技术威海职业学院生物与化学工程系二0一一年二月目录前言……………………………………………………………………………………………1项目一L-胱氨酸的制备与鉴定……………………………………………………………2项目二溶菌酶的制备………………………………………………………………………4项目三卵磷脂的制备及鉴定………………………………………………………………6项目四甘露醇的制备及鉴定………………………………………………………………7项目五芦丁的提取与鉴定…………………………………………………………………9参考文献…………………………

2、…………………………………………………………119前言《生化制药技术》是生化制药技术专业的专业核心课程之一，生化制药技术实验实训指导书是本课程的重要组成部分。根据该课程教学大纲的规定，学生在掌握一定生化药品制备技术理论知识的基础上，必须通过实验实训学习，掌握生化药品制备常用的提取、分离、精制、干燥等方法和实验操作技术，培养学生科学认真的工作态度和熟练的基本操作技能。本实验实训指导书的编写，主要参照《生化制药技术》、《现代生物制药工艺学》、《天然植物化学》等参考资料所收载的部分内容，结合本专业实训基地现有的实验实训条件，从中选出较

3、为典型的生化药品实例的制备方法，供学生实验学习使用。实验设计包括氨基酸、蛋白质、酶、脂及多糖类等，生化药品制备与鉴定基本操作技术，以培养学生进行生化药品的生产制造与鉴别的能力。为了完成本课程实验实训教学大纲的学习内容，要求学生实验实训课前，必须认真预习，明确实验目的，熟悉实验内容和方法，并结合课堂教学，理解实验的基本原理；实验中必须有严谨的科学态度和实事求是的工作作风；严格操作，正确使用仪器，认真观察实验现象，详细、真实地做好实验原始记录；实验报告要求书写正确规范；严格遵守实验室规章制度，注意安全，保持室内卫生。本实验实训指导书

4、由李顺康、高英霞、殷永新、肖凤华、元超老师编写完成，主要供生化制药技术实验实训的学生参考。由于编者按水平有限，加之时间仓促，如有不当之处，恳请读者批评指正。——编者项目一L-胱氨酸的制备及鉴定一、实验目的要求1、熟悉用人发制备氨基酸类药物的原理。2、掌握水解法制备氨基酸的方法。二、实验重点和难点L-胱氨酸的制备与精制方法。三、实验原理蛋白质由一定数量的氨基酸经过特定的排列方式组合而成的。因此，在一定条件下将蛋白质水解可得到各种氨基酸的混合液9，再经过进一步的提取、精制，即可得到所需的氨基酸。本实验是用已洗净并干燥的人发，先用酸水

5、解，然后调节pH至胱氨酸等当点（5.05左右）时，胱氨酸从水解液中沉淀出来，经精制得到其结晶。四、实验仪器、试剂与材料1、仪器：500ml短颈圆底烧瓶、冷凝管、电热套、玻璃漏斗、玻璃棒、抽滤瓶、布氏漏斗、恒温水浴锅、真空泵、表面皿、烧杯、滤纸。2、试液：（1）10mol/L盐酸溶液：取盐酸90ml加水稀释至100ml，摇匀，即得。（2）6%盐酸溶液：取盐酸6ml加水稀释至100ml，摇匀，即得。（3）10%氢氧化钠溶液：取氢氧化钠10g，加水溶解，放冷，加稀释至100ml，摇匀，即得。（4）25%氢氧化钠溶液：取氢氧化钠25g，

6、加水溶解，放冷，加稀释至100ml，摇匀，即得。（5）10%氨水溶液：取氨10ml加水稀释至100ml，摇匀，即得。（6）2%硫酸铜溶液：取硫酸铜2g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，即得。（7）0.1%EDTA溶液：取乙二胺四乙酸二钠0.1g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，即得。（8）75%乙醇溶液：取无水乙醇75ml加水稀释至100ml，摇匀，即得。（9）0.5%茚三酮-丙酮溶液：取茚三酮0.5g，加丙酮溶解并稀释至100ml，摇匀，即得。3、试剂与材料：胱氨酸对照品、粉末活性炭、苯酚、盐酸、氢氧化钠、氨、硫酸铜、乙二

7、胺四乙酸二钠、无水乙醇、95%乙醇、茚三酮、丙酮、人发。五、实验操作1、人发的处理：取无染色的人发，用碱性或中性洗涤剂洗净，用清水洗至水呈中性，晾干并剪短备用。2、回流装置安装：在回流冷凝管上端接一弯玻璃管，下连一小漏斗用水封住，漏斗刚好接触水面，但不能伸到水中以免倒吸，避免氯化氢气体自仪器中逸出到空气中。3、水解：称取人发50g，置圆底烧瓶中，加10mol/L盐酸溶液100ml，加沸石或玻璃珠3粒，加热回流6～7小时，回流过程保持缓缓沸腾。水解完全后应不呈双缩脲反应，可停止反应，否则应继续水解至反应完全。4、双缩脲检查：取水解

8、液3ml，加入少量粉末活性炭，在80℃水浴中脱色数分钟，过滤；向滤液中加10%氢氧化钠溶液3ml使呈碱性，然后沿管壁加2%硫酸铜溶液4～5滴，观察有无紫红色出现，若出现，水解未完全需继续水解。5、胱氨酸粗品制备：将水解液趁热过滤除去残渣，滤液呈深棕色。当滤液温度