WI-03-21洁净室浮游菌测试方法.doc

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1、恩施金凰新材料有限公司文件编号WI-03-21版号A.0洁净室(区)浮游菌检验方法页次1/6生效日期2020/01/021．目的制订洁净室(区)浮游菌检验方法，对从事测试的工作人员进行培训指导，规范检验方法及操作。2．适用范围本方法适用于洁净室(区)或无菌区域(包括超净工作台)浮游菌的检测和环境的验证。3．职责质检部对本规程实施负责。4.程序4.1仪器：恒温培养箱、分析天平、干燥箱、超净工作台、高压蒸汽灭菌器、电热恒温水浴锅4.1.1浮游菌采样器使用要点4.1.1.1必须按照测试仪器的检定周期，定期对仪器作检定，使用校验合格，且在使用有效期内的仪器。4.1

2、.1.2在100级洁净区内不能用铅笔和橡皮。4.1.1.3使用测试仪器是应严格按照仪器说明书操作。4.1.1.4仪器开机，预热至稳定后，方可按仪器说明书的规定对仪器进行校正，同时检查采样流量，并根据采样量设定采样时间。4.1.2恒温培养箱：必须定期对恒温培养箱进行校验。4.2器具：烧杯、量筒、三角瓶（250ml、500ml）、硅胶塞、培养皿（φ150mm）4.3培养基：大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基4.4器具灭菌：器具（如培养皿等）应按下述方法灭菌：置手提式压力蒸汽消毒器内121℃20分钟高压灭菌，或置于电热恒温鼓风干燥箱内160℃2小时干热灭菌。4.5测

3、试条件4.5.1测试前，被测试洁净室（区）的温、湿度须达到规定的要求，风速或压差必须控制在规定值范围内。4.5.2温度和湿度：洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（温度控制在18℃～26℃，相对湿度控制在45%～65%之间为宜）。4.5.3压差：空气洁净度不同的洁净室（区）之间的压差应≥5.0Pa，空气洁净度级别要求高的洁净室（区）对相邻的空气洁净度级别低的洁净室（区）一般要求呈相对正压。恩施金凰新材料有限公司文件编号WI-03-21版号A.0洁净室(区)浮游菌检验方法页次2/6生效日期2020/01/024.5.4测试时间4.5.4.1

4、在空态或静态a测试时：1）对单向流，测试应在净化空气调节系统正常运行时间不少于10min后开始；2）对非单向流，测试应在净化空气调节系统正常运行时间不少于30min后开始。4.5.4.2在静态b测试时：1）对单向流，测试宜在生产操作人员撤离现场并经过10min自净后开始；2）对非单向流，测试宜在生产操作人员撤离现场并经过20min自净后开始。4.5.4.3在动态测试时，则须记录生产开始时间以及测试时间。4.5.5测试人员4.5.5.1测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。4.5.5.2空态和静态测试时，室内测试人员不得多于2人，当面积超过100m2又

5、需快速完成测定任务时，可适当增加人数。4.5.5.3测试人员应位于测点下风侧并远离测点，动作要轻，保持静止。4.6测试方法4.6.1制培养皿（平板）4.6.1.1配制培养基（按瓶签上的《用法》进行配制）以下配制量为1000ml：a.称量：称取瓶签上《用法》标示的大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基粉末的量，倒入1000ml烧杯中。b.溶解：在装有大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基粉末的烧杯中加入蒸馏水1000ml，搅拌均匀后，加热煮沸至完全溶解。c.冷却：冷却至23±2℃。d.测pH值：使灭菌后为pH7.3±0.2。e.分装：分装于三角瓶中，盖上硅胶塞，包好。f.灭

6、菌：121℃15分钟高压灭菌。4.6.1.2将已灭菌的大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基，冷至60℃左右，在无菌操作要求下，倾注约20ml至无菌培养皿中（Φ90mm），加盖后室温放置凝固后。注：如采用其他规格的平皿，可适当增减培养基的量，使之在平皿中形成至少2mm厚的琼脂层。4.6.1.3制备好的培养基平皿如需存放后使用，应标记名称、制备日期等，存放在2℃～8℃环境下，1周内使用有效。恩施金凰新材料有限公司文件编号WI-03-21版号A.0洁净室(区)浮游菌检验方法页次3/6生效日期2020/01/024.6.1.4使用前应仔细检查每个培养皿的质量，培养基及培

7、养皿有变质、破损或污染的不能使用。4.6.2测试前仪器、培养皿表面必须严格消毒。4.6.2.1采样器进入被测洁净区域前先用消毒剂擦拭外表面或紫外线消毒后，从传递窗传入洁净区域。4.6.2.2用消毒剂擦净培养皿的外表面。4.6.2.3采样前，先用消毒剂清洗采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外表面、采样结束，再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。4.6.2.4采样口及采样管，使用前必须严格消毒。如用消毒剂对采样管的外壁及内壁进行消毒时，应将管中的残留液倒掉并晾干。4.6.2.5采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或条换培养皿前，双手用消毒剂消毒或戴无

8、菌手套操作。4.6.2.6采样仪器经消毒后先不放入培养皿，开启浮游