基于重组外膜蛋白P2的副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA方法的建立.pdf

《基于重组外膜蛋白P2的副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA方法的建立.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、●‘T●●-lICULTURAE华北农学报·2011，26(4)：61—66¨哪U-$啊I∞基于重组外膜蛋白P2的副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA方法的建立李淼，李春玲，叶严锋，宋帅，杨冬霞’(1．广东省农业科学院兽医研究所，广东广州510640；2．广东省兽医公共卫生公共实验室广东广州510640；3．华南农业大学兽医学院，广东广州510642)摘要：旨在建立一种基于重组副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白(Omp)P2的检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。将重组表达的OmpP2纯化后作为ELISA包被抗原，建立了一种基于重组P2蛋白的间接ELISA方法，并对此方法的反应条件进行

2、了优化。确定ELISA的最佳条件为：抗原包被浓度为1．5g，，mL，被检血清1：80稀释，辣根过氧化物酶标记的羊抗猪IgG(二抗)1：4000稀释。确定的阴性血清临界D5。值为0．231，阳性血清If缶界D．，。值为0．280。将该ELISA方法与加拿大Biovet公司生产的副猪嗜血杆菌抗体检测试剂盒做相关比较，结果符合率为88．9％。本试验建立的方法具有良好的特异性，可以用于HPS抗体的检测。关键词：副猪嗜血杆菌；重组OmpP2；间接ELISA中图分类号：$852．16文献标识码：A文章编号：1000—7091(2011)04—0061—06DevelopmentofanInd

3、irectELISABasedontheRecombinantouterMembraneProtein(Omp)P2forDetectingAntibodiesagainstHaemophilusparasuisLIMiao，LIChun—ling，YEYan．feng’。，SONGShuai一，YANGDong．xia’(1．InstituteofVeterinaryMedicine，GuangdongAcademyofAgrieuhurelSciences，Guangzhou510640，China；2．GuangdongOpenLaboratoryofVeterinaryP

4、ublicHealth，Guangzhou510640，China；3．CollegeofVeterinaryMedicine，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，China)Abstract：ThisexperimentwasconductedtodetecttheantibodyofHaemophilusparasuis(HPS)basedontherecombinantoutermembraneprotein(Omp)P2throughindirectELISA．AnindirectELISAwasdevelop

5、edandop．timizedwiththepurifiedrecombinantHPSOmpP2ascoatingantigen．TheoptimalconditionsofELISAweredeter-minedasfollows．Themicroplatewascoatedwith150ngoftherecombinantI)2proteinperwell，andthenblockedovernightat4℃．Theserumsamplesweredilutedat1：80andgoatanti—pigHRP-IgGwasdilutedat1：4000．Thecutofv

6、aluesat450nmofthenegativeorthepositiveserawere0．231or0．280．ThecoincidenceratebetweentheELISAandBiovetHPSantibodytestkitwasdeterminedas88．9％．TheresultsindicatedthattheindirectELlSAwasspecificandcouldbeusedfordetectinganti-HPSantibodies．Keywords：Haemophilusparasuis；RecombinantOmpI)2；IndirectELI

7、SA副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis，HPS)是到10％～15％，严重时死亡率可达50％以上，随猪上呼吸道的一种常在菌，因其被证明是以多发性着养猪业的发展，该病已成为全球范围内影响养猪浆膜炎、关节炎、呼吸困难、高热及高死亡率为特征业的典型细菌性疾病之一。的格拉泽氏病(GlasserSdisease)的病原体而广受关目前，国内外关于HPS检测方法的报道并不注⋯。副猪嗜血杆菌病主要发生在断奶前后和仔多，主要有补体结合试验(CF)、间接血凝试验猪阶段，常见于5～8周