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1、如何选用特殊细胞系培养基?培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM屮培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMT-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始，各种冃的无血清培养垠好首选AIMV（12005）培养基（SFM）。L-谷氨酰胺在细胞培养屮匝要吗？它在溶液屮不稳定吗？L・谷氨酰胺在细胞培养时是匝要的。脱抻氨基后，L・谷氨醜胺可作为培养细胞的能量來源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液屮经过一段时间后会降解，但楚确切的降解率一岚没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性
2、。GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定？GlutaMAX-I二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保护。一种肽輛逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常稳定,即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解,如果在相同条件下，L・谷氨醜胺几乎完全降解。什么培养基中可以省去加酚红？酚红在培养基屮被用來作为PH值的指示剂：屮性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。硏究表明，酚红可以模拟固酹类激素的作用，（特别是雌激素）。为避免固醉类反应，培养细
3、胞，尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基。山于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明,酚红可以模拟固酹类激索的作用，（特别是雌激索九为避免I古I醉类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基。山于酚红干扰检测，一些硏究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。如何用台盼兰计数活细胞？用无血清培养基把细胞悬液稀释到200〜2000个/亳升，在0.1亳升的细胞悬液屮加入0.1亳升的0.4%的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球
4、计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。如何消除纽织培养的污染？当朿要的培养污染时，硏究者可能试图消除或控制污染。冇先，确定汚染物是细菌、貞菌、支原体或酥母,把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器川L和超净台，检查HEPA过滤器。高浓度的抗生素和抗痔菌索训能对一些细胞系有毒性，因闻，做剂戢反应实验确定抗生索和抗零菌索产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生索如两性霍索B和抗霍菌索如泰乐菌索时尤其頂要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。1.在无抗生索的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。2.分散细胞
5、悬液到多孔培养板屮，或几个小培养瓶屮。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生索加入到每一个孔中。例如,两性霉素B推荐下列浓度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0mg/ml.3.毎天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。4•确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2〜3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2〜3代。5.在无抗生索的培养基中培养细胞一代。6.重复步骤4。7.在无抗生索的培养基中培养4〜6代，确定污染是否以已被消除。培养基屮丙酮酸钠的作用是什么？丙爾酸钠可以作为细胞培养屮的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖
6、的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。目录上说,Hank's平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用,不需要CO2培养箱。原因是什么?Hank's平衡盐溶液(HBS)和Earle's平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别？HBS和EBS的主要差别在于碳酸氢钠的水平，在Eagles(2.2g/L)中比在Hanks(0.35g/L)中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2中，溶液会变碱，Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱屮保存纽织，需要用Eagles液,。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基屮储存的组织，用Han
7、ks液就可以了。二价离子抑制胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酹时加入EDTA的H的是什么？二价离子的确抑制胰蛋白嗨活性。EDTA用來螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持抑制丿I夷蛋白嗨的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前，用EDTA清洗细胞，以消除來自培养基中所有的二价离子。我试用SF900II时，细胞生长良好，但是我的蛋白产物不如使用Graces液和10%胎牛血清时效果好。如果目的蛋白是一个后期蛋口，它将与蛋白爾一起表达，这些蛋白悔将会作用于目的蛋口。在加有血清的培养基屮，这些蛋口酶将作用到血清中的蛋白，从而使H的蛋口产品保持完好。在无血清配方屮，蛋白酶作用的唯一底物是你的日
8、的蛋白。为
