猪母乳中抗猪传染性胃肠炎病毒IgA检测方法的建立-论文.pdf

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1、第36卷第7期中国预防兽医学报Vo1．36．No．72014年7月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJu1．2014doi：10．39698．issn．1008—0589．2014．07．12猪母乳中抗猪传染性胃肠炎病毒IgA检测方法的建立蒋凤英，邹勇，何锡忠，李春华，彭丽英，张婉华，周宗清，张俊平，许宝华，张春玲，徐伟林(1．上海市农业科学院畜牧兽医研究所，上海201106；2．南昌大学医学院，江西南昌330006；3．上海科立特农科(集团)有限公司，上海201106)摘要：

2、为建立检测猪母乳中抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)IgA抗体的间接ELISA方法，本研究利用纯化的TGEV作为抗原，通过方阵法确定包被抗原和待检抗体的最佳工作浓度，经过对各种反应条件进行优化，建立了猪母乳抗TGEVIgA抗体检测方法。对TGEV阳性乳汁样品最低检测浓度为1：320。该方法不与其他常见猪病毒的阳性乳样发生交叉反应，重复性试验的变异系数均小于8．1％。对怀孕母猪免疫后不同时间的乳样检测结果表明该方法与中和试验的符合率达91．5％。本实验建立的检测方法具有良好的敏感性和特异性，为TGEV粘膜疫苗的设计及免疫效果评价提出新

3、的思路。关键词：猪传染性胃肠炎病毒；IgA抗体检测；间接ELISA中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008—0589(2014)07—0551．04EstablishthedetectionmethodofIgAantibodiesagainsttransmissiblegaStrOenterItiSvirusinSOWmilkJIANGFeng—ying，ZOUYong，HEXi—zhong，LIChun—hua，PENGLi—ying，ZHANGWan—hua，ZHOUZong—qing，ZHANGJun—p

4、ing，XUBao-hua2，ZHANGChun—ling，XUWei—lin。(1．AnimalHusbandryandVeterinaryResearchInstitute，ShanghaiAcademyofAgriculturalSciences，Shanghai201106，China；2．NanchangUniversityMedicalCollege，Nanchang330006，China；3．ShanghaiCo—EliteAgriculturalSci—Tech(Group)Co．，Ltd．，Shanghai20

5、1106，China)Abstract：ToestablishthedetectionmethodofIgAantibodiesagainsttransmissiblegastroentefitisvirus(TGEV)fromSOWmilk，theELISAwasdevelopedwithpurifiedTGEVascoatingantigen．Thereactionconcentrationsoftheassaywereoptimizedincluding：12txg／mLofcoatingantigen，1％BSAforbl

6、ockingfor2hours1：40dilutionofmilksampleincubatingfor60min，，1：12，000dilutionofrabbitanti·porcineIgA—HRPreactingfor30min．While．nocrossedreactionswithothercommonswinediseasesinpositivedairy．Variationcoeficientofrepeatabilitywaslessthan8．1％．Detectionresultsfromdairyofpreg

7、nantSOWSatdifrerenttimesafterimmunizationindicatedthatthecoincidencerateofthismethodwithneutralizationtestwas91．5％．TheestablishedmethodforIgAdetectioninSOWmilkhashighsensitivityandspecificity，whichproposesnewideasforTGEVvaccinedesignandimmuneefectevaluation．Keywords：t

8、ransmissiblegastroenteritisvirus；IgAdetection；indirectELISA*Correspondingauthor收稿日期：2013．0828基金项目：江西省自然科学基金项目(2007GZY1003)；上