HCMV急性间质性肺炎小鼠模型的建立-论文.pdf

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1、·1214·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Sep；49(9)HCMV急性问质性肺炎小鼠模型的建立庄晓亮，木朝宇，俞俊岭，张文昌，甘霖，陈敬贤，王明丽摘要目的建立人巨细胞病毒(HCMV)急性间质性肺炎严重，致死率高-4J。由于缺乏疫苗预防，目前能用的小鼠模型。方法用5．5×10PFU的HCMVAD169株尾于临床抗病毒治疗的药物不仅种类少，而且毒性高，静脉注射6—8周SPF级BALB／c小鼠作为实验组，同时设且长期使用该类抗病毒药物会出现并发症，例如药立正常细胞作为对照组，分别于

2、接种后第5天和第30天处物中毒、易出现耐药毒株等，所以亟需研发新的抗病死小鼠，无菌取小鼠肺组织，通过病毒分离、PCR检测病毒特毒药物。但目前缺乏可供研究用的合适动物模型。定保守基因、免疫组化、Westernblot和HE染色的方法，观察该研究采用尾静脉注射HCMVAD169毒株的方式检测小鼠肺组织中HCMV及其组织病理变化。结果在感感染BALB／c小鼠，通过特异性检测确定了HCMV染后第5天和第30天实验组小鼠的肺组织中分离出了HC．急性感染BALB／c小鼠并导致急性间质性肺炎。现MV病毒；PCR检测到HCMV特异性早晚期基因IE和UL

3、55DNA；Westernblot、免疫组化检测到HCMV特异性早晚期蛋报道如下。白IE和gB；HE染色证实肺组织有明显急性间质性肺炎的1材料与方法病理改变；对照组对应结果全为阴性。结论通过尾静脉注射HCMVAD169株病毒，在感染后第5天成功构建了HCMV1．1细胞株和病毒株人胚成纤维细胞株(HF急性间质性肺炎小鼠模型，该模型的建立有利于该种疾病的株)由安徽医科大学微生物学教研室自行制备，并发病机制研究及相关抗病毒疫苗和药物的研发。经PCR鉴定排除疱疹病毒污染，实验中使用的是6关键词人巨细胞病毒；小鼠模型；间质性肺炎—8代HF细胞。H

4、CMVAD169毒株由复旦大学医中图分类号R563．1+3；R373．9；R341学院微生物教研室提供，本室自行保存，复苏后在文献标志码A文章编号1000—1492(2014)09—1214—04HF细胞上进行增毒，并用空斑形成实验纯化3次后尾静脉注射接种小鼠。人巨细胞病毒(humancytomegalovirus，HCMV)1．2实验动物SPF级BALB／c雌性小鼠24只，4感染引起的急性间质性肺炎是临床最常见的疾病之～6周龄，14～2O只，由安徽省实验动物中心提一，不仅与肾移植受体的急性排斥反应相关，多在术供，饲养于独立送风隔离笼具

5、系统内，该系统由苏州后3个月内发生，而且是引起移植受者死亡的重要吴县实验动物设备制造厂生产，等级为屏障系统。原因，发病率为50％一70％，死亡率高达25％～BALB／c小鼠需在该隔离系统内适应3d后方可用31％⋯。有研究表明，HCMV肺炎会引起炎症于实验。性肠病(inflammatoryboweldisease，IBD)患者的死1．3主要试剂DMEM培养基、小牛血清购自美国亡，尤其是引起伴有咳嗽、呼吸困难患者死亡的重要Gibco公司；Taq酶购自大连TaKaRa公司；免疫组化原因之一，临床实践证实，由HCMV感染引起的间试剂盒、抗B—a

6、ctin抗体、HRP标记的羊抗鼠IgG购质性肺炎相比其他原因引起的肺炎产生的后果更为自北京中杉金桥生物技术有限公司；HCMVIE．1抗2014—01—06接收体、gB抗体为本室自制；聚偏氟乙烯(polyvinylidene基金项目：国家自然科学基金(编号：30872253)；安徽省科技厅科技fluoride，PVDF)膜购自美国Biosharp公司；超敏化学攻关项目(编号：8010302179)；安徽省教育厅自然科学重发光试剂盒购自瑞士Thermo公司。点课题(编号：KJ2009A041Z)1．4PCR引物参照文献，分别以HCMVAD1

7、69作者单位：安徽医科大学微生物学教研室，合肥230032株的即刻早期(IE)和晚期基因糖蛋白B(gB)哥伦比亚大学病理与细胞生物学教研室，纽约10032基因为模板合成PCR引物，由上海Invitrogen公司作者简介：庄晓亮，男，硕士研究生；陈敬贤，男，教授，硕士生导师，责任作者，E—mail：jc28@合成。IE上游引物为5．AAGCGGCCTCTGATAAC．columbia．du；CAAGCC一3，下游引物为5．AGcAcCATccTCCTcT—王明丽，女，教授，硕士生导师，责任作者，E—mail：TCCTCTGG-3，扩增产物

8、为431bp；gB上游引物为1952987441@qq．con5一GGAAACGTGTCCGTCTTrGA．3，下游引物为5．1J1J1J1J1J安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedic