武汉科前生物猪瘟ELISA试剂盒使用说明书.doc

《武汉科前生物猪瘟ELISA试剂盒使用说明书.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒使用说明书【样品制备】取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。【洗涤液配制】使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解（最好在37℃水中加热5~10分钟），然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释（例如：每板用20ml浓缩液加上380ml水），稀释好的洗涤液在2~8℃可以存放7天。【样品和对照稀释】样品稀释：1:40的体积稀释待检血清样品（195μl样品稀释液中加5μl待检血清样品）。对照稀释：在血清稀释板中按1:40分别稀释阳性对照和阴性对照（234μl样品稀释液中加6μl对照血清）。【注意事项】1 试剂盒使用前各试剂

2、应平衡至室温，使用后放回2~8℃。2 不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。3 不要用口移液。4 底物液B不要暴露于强光，避免接触氧化剂。5 未使用的抗原包被板切记不要撕开上面的封口膜。6 待检血清样品数量较多时，应先使用血清稀释板稀释完所有要检测血清，再将稀释好的血清转移到检测板，使反应时间一致。7 浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释，如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。8 严格按照操作说明书可以获得最好的结果。【操作步骤】1 取抗原包被板（根据样品多少，可拆开分次使用），分别将稀释好的待检血清和对照各取100μl加入到抗原包被板孔中，待检样品做1孔，阴性对照和阳

3、性对照各设2孔，每孔100μl。轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃温育30分钟。2 甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μl，静置3分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共计洗涤5次，3 每孔加羊抗猪酶标二抗100μl，置37℃温育30分钟。4 洗涤5次,方法同2。切记每次在干净吸水纸上拍干。5 每孔先加底物液A一滴（50?l）、再加底物液B一滴（50?l）,混匀,室温(18℃~25℃)避光显色10分钟。6 每孔加终止液一滴(50μl)，10分钟内测定结果（测定前在震荡器上轻轻震动一下）。【结果判定】在酶标仪上测各孔OD630nm值。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630nm值≥0

4、.6，阴性对照孔平均OD630nm值必须＜0.3。样品OD630nm值＞0.35，判为阳性；样品OD630nm值＜0.35，判为阴性。注意：用620~650纳米波长测定结果均有效。