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1、遗传HEREDITAS(Beijing)17(5):5—71995不同预处理方法对大麦花药-花粉培养的影响李文泽胡含(莱阳农学院农学系,山东莱阳265200)(中国科学院遗传研究所,北京100101)摘要研究了甘露醇预处理的适应性以及pH值对甘露醇预处理效果的影响;并首次将山梨醇预处理应用到大麦花药培养中,获得理想的实验结果。第一,采用甘露醇预处理,17种材料平均愈伤组织诱导率为20.67块ö花药,绿苗产量为2.46株ö花药。第二,甘露醇预处理溶液的pH值不同,其预处理的效果也不同。其中,愈伤组织诱导率和绿苗产量均以pH5.6最高。第三
2、,不同浓度(0.1—0.5molöL)的山梨醇预处理3天绿苗产量差异不显著;但同一浓度(0.3molöL)山梨醇预处理不同天数(1—7天)绿苗产量差异极显著,以3天处理效果最好,绿苗产量是对照的51.2倍。关键词大麦,预处理,甘露醇,山梨醇,pH值EffectsoftheDifferentPretreatmentMethodsonBarley(HordeumvulgareL.)AntherCultureLiWenze(Dept.ofAgronomy,LaiyangAgriculturalCollege,Laiyang,Shandong2
3、65200)HuHan(InstituteofGenetics,AcademiaSinica,Beijing100101)〔6〕如果花药或花粉从植株上取下直接接种进行培养,愈伤组织诱导率及绿苗产量都非常低。如果花药在接种〔1,2〕以前或以后采用适当的方法进行预处理,能使绿苗产量成百倍至千倍的增加。在花药培养中被采用的预处理〔3〕方法很多,包括高温预处理、低温预处理、离心、射线及甘露醇预处理等方法。具体采用什么方法因材料而异。〔1〕〔2〕〔2〕在大麦花药培养中,主要采用低温预处理和甘露醇预处理。李文泽等报道采用低温预处理可以使大量材料获得
4、较高的绿苗产量。目前,关于甘露醇预处理的研究只限于单一材料(Igri),表现作用效果极好,并且比采用〔2〕低温预处理可以缩短实验周期30—45天。但是,甘露醇预处理是否也适合于大麦材料,至今无研究报道。本文研究了甘露醇预处理的适应性以及预处理溶液的pH值对处理效果的影响,并首次将山梨醇预处理应用到大麦花药培养中,提高了花药培养效果,为阐明小孢子脱分化的机理提供依据。1材料与方法甘露醇预处理的适应性实验采用17种材料(表1),其它所有实验处理均以普通大麦(HordeumvulgareL.)品种Igri为材料进行研究。供试材料于1992年和
5、1993年3月上旬播种于中国科学院遗传所实验田。5月初开始取材料。取材的适宜时期为单核中期。山梨醇预处理从大田取适宜时期的材料,经消毒后,将花药直接接种到含有1ml不同浓度的山梨醇溶液的培养皿(30×15mm)内,预处理1—7天,花药接种密度为60枚öml。然后吸出山梨醇溶液,加入1ml新鲜诱导培养基进行培养。甘露醇预处理的具体方法和诱导培养基、分化培养基的成〔2〕份以及实验所采用的参数同李文泽等报道。6遗传HEREDITAS(Beijing)199517卷2结果与讨论2.1甘露醇预处理适应性研究17种供试材料经过0.3molöL甘露醇
6、预处理3天,其愈伤组织诱导率、绿苗分化率及绿苗产量均存在明显差异(表1)。愈伤组织诱导率最高的材料为Igri,达到38.00块ö花药;最低的材料为〔(韭崎10号×甘木二条)×韭崎10号〕×韭崎10号F1,仅能产生3.94块ö花药。绿苗分化率以〔(甘木二条×Igri)×Igri〕×IgriF1最高,达到24.47%;最低的材料为〔(鬼怒1号×早熟3号)×鬼怒1号〕×鬼怒1号F1,仅有2.00%。而绿苗产量以Igri为最高,达到7.45株ö花药;最低的材料为〔(韭崎10号×甘木二条)×韭崎10号〕×韭崎10号F1,仅为0.13株ö花药。17
7、种材料平均愈伤组织诱导率为20.76块ö花药,绿苗分化率为10.56%,绿苗产量为2.46株ö花药。表1甘露醇预处理的适应性接种愈伤组织绿苗白苗绿苗白苗材料花药数诱导率分化率(%)分化率(%)产量产量Igri30038.0019.6013.077.455.00Igri×HarringtonF130028.2013.335.003.761.41Harrington×IgriF124034.784.352.171.510.76Igri×甘木二条F130031.5816.009.335.052.95甘木二条×IgriF130021.649.7
8、83.262.120.71Igri×韭崎10号F124013.5513.733.921.860.53韭崎10号×IgriF130022.6610.311.032.340.23早熟3号×IgriF130017
