离体蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备.pdf

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1、实验5.1离体蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备Sciatic-gastrocnemiusPreparationofToad预习要求1．理论知识：生理溶液的的配制，任氏液是蛙类的生理溶液。2．技术知识：蛙类的毁脑脊髓技术。蛙类的某些基本生命活动和生理功能与哺乳类动物有相似之处，而且其离体组织的生活条件比较简单，易于控制和掌握，来源也较丰富，因此在生理学实验，常用蛙或蟾蜍的坐骨神经腓肠肌标本来观察神经肌肉的兴奋性、刺激与反应的规律及肌肉收缩的特点等。制备具有正常兴奋收缩功能的蛙类坐骨神经腓肠肌标本是生理学实验的基本操作技术之一。1材料和方法1.1

2、材料：蟾蜍或蛙；蛙板、探针、粗剪刀、手术剪刀、尖镊子、玻璃分针、大头针、培养皿、滴管、瓷碗、锌铜弓、任氏液。1.2方法1.2.1毁脑脊髓：取蟾蜍一只，用左手握住，以示指压其头部前端使其尽量前俯（图5.1-1），右手持探针自枕骨大孔处垂直刺入，进针深度约2mm，有脱空感即到达椎管，随即将探针改变方向向上刺入颅腔，向各侧不断搅动，彻底捣毁脑组织；再将探针原路退出，向下刺向尾侧，捻动探针使逐渐刺入整个椎管内，捣毁脊髓。此时蟾蜍下颌呼吸运动应消失，四肢松软，即成为一毁脑脊髓的蟾蜍（pithedtoad）。否则须按上法再行捣毁。图5.1-1毁蟾蜍

3、脑脊髓1.2.2剪除躯干上部及内脏：用粗剪刀在颅骨后方剪断脊柱。左手握住蟾蜍下肢，大拇指抵住脊柱尾骨，右手用粗剪刀沿脊柱两侧（避开坐骨神经）剪开腹壁。此时躯干上部及内脏即全部下垂（图5.1-2）。剪除全部躯干上部及内脏组织，弃于瓷碗内。图5.1-2剪除躯干上部及内脏1.2.3剥皮：避开神经，左手持镊子夹住脊柱，右手捏住皮肤边缘，向下牵拉剥离皮肤。拉至大腿时，如阻力较大，可先剥下一侧，再剥另一侧。将全部皮肤剥除后，将标本置于盛有任氏液的培养皿中。然后洗净双手和用过的全部手术器械，再进行下列步骤。1.2.4完成标本的坐骨神经部分方法①：避开

4、坐骨神经，用粗剪刀从背侧剪去骶骨，然后沿中线将脊柱剪成左右两半，再从耻骨联合正中央剪开。将已分离的标本浸入盛有任氏液的培养皿中。取腿一条，先用玻璃分针沿脊柱侧游离坐骨神经腹腔部，然后用大头针将标本背位固定于蛙板上。用玻璃分针在股二头肌和半膜肌之间的坐骨神经沟内，纵向分离暴露坐骨神经的大腿部分，直至分离至腘窝胫神经分叉处。然后剪断股二头肌腱、半腱肌和半膜肌肌腱，并绕至前方剪断股四头肌腱。自上向下剪断所有坐骨神经分支。将连着3～4节椎骨的坐骨神经分离出来。将已游离的坐骨神经搭在腓肠肌上。用粗剪刀自膝关节周围向上剪除并刮净所有大腿肌肉，在距膝

5、关节约1cm处剪断股骨。弃去上段股骨，保留部分即为坐骨神经腓肠肌标本（图5.1-3）。图5.1-3坐骨神经-腓肠肌标本方法②：上述已剥皮的标本不先分离两腿，取仰卧位，用玻璃分针将两侧坐骨神经紧靠脊柱根部各结扎一线暂不剪下。再将标本俯卧，用三根大头针钉在蛙板上，使充分伸直成人字型。用尖头镊子夹住骶骨尾端稍向上提，使骶部向上窿起，用粗剪刀水平位剪除骶骨。用弯头玻璃分针自剪口处伸入将一侧坐骨神经轻轻勾出，在其下方横置玻璃分针，使其暴露于剪口上方并具有一定的张力。用玻璃分针在坐骨神经沟内分离出坐骨神经的大腿部分，直至腘窝处。剪断股二头肌和半膜肌

6、等肌腱，剪断前方的股四头肌腱。然后以同样的步骤，处理另一侧之大腿坐骨神经。撤除固定，从脊柱根部剪断坐骨神经，手执结扎线将神经轻轻提起，顺序向下剪断其所有分支。将神经搭在腓肠肌上，用粗剪刀自膝关节周围向上剪除刮净所有大腿肌肉，距膝关节约1cm处剪断股骨。依同法处理另一侧标本。用尖头镊子在上述坐骨神经腓肠肌标本的跟腱下方穿孔，穿线结扎。提起结扎线，在结扎线下方剪断跟腱，并游离腓肠肌至膝关节处，用粗剪刀水平方向伸进腓肠肌与小腿之间，在膝关节处剪去腓肠肌以外的部分。保留部分即为附着于股骨之上的、具有坐骨神经支配的腓肠肌标本。将标本浸入盛有新鲜任

7、氏液之培养皿中待用。实验注意事项①制备神经肌肉标本过程中，要不断滴加任氏液，以防标本干燥，丧失正常生理活性。②操作过程中应避免强力牵拉和手捏神经或夹伤神经肌肉。③毁脑脊髓时防止蟾蜍皮肤分泌的蟾蜍毒液射入操作者眼内或污染实验标本。2结果取锌铜弓在任氏液中沾湿后迅速接触坐骨神经，如腓肠肌发生收缩，表明标本具有正常的生理活性，兴奋性良好，说明实验操作成功。3讨论（1）用锌铜弓刺激坐骨神经如何引起腓肠肌收缩？（2）如何保持离体标本的机能正常？探索性问题1．该标本可以进行哪些实验研究？试设计实验内容。2．你认为该标本的制作方法有哪些需要改进的地方

8、？请说出你的想法。夏满莉周新妹实验5.2不同强度和频率的刺激对肌肉收缩的影响EffectofStimulationwithDifferentIntensitiesandFrequenciesonMuscul