液相教程之液相常见问题分析

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1、液相色谱教程液相色谱常见问题分析©2008WatersCorporation色谱问题的可能根源¡流动相¡泵¡进样器¡保护柱¡在线过滤器¡连接管线及接头¡色谱柱¡软件¡检测器¡其它偶然因素¡样品逻辑判断—将会节省解决问题的时间©2008WatersCorporation2解决色谱问题的策略问题观察色谱图--尝试对问题进行分类简化问题--最先对最容易的部分进行故障排除化学因素机械因素¡色谱柱¡泵¡保护柱¡进样器¡流动相¡检测器¡样品/样品瓶问题¡数据采集¡谱带展宽/连接©2008WatersCorpo

2、ration3判断故障与故障排除的原则¡规则一：确认问题至少发生两次以上。如果问题不重复出现，很难证实其确实是问题¡规则二：从最简单的因素入手¡规则三：一次只变化一个因素，以使你能够确认所变因素与问题之间的关联©2008WatersCorporation4判断故障与故障排除的原则¡规则四：恢复原状。如果使用更换组件方法来查找问题之所在,完毕后应将原有完好组件安装回原处。否则,换下的组件将来很难再利用,会造成浪费¡规则五：养成记录的好习惯。一个完整的好记录是成功地进行故障排除的关键©2008Wate

3、rsCorporation5HPLC实验中常见问题分类¡HPLC系统压力问题—压力高—压力低或没有压力—压力不稳¡流路基线噪音问题—基线不稳定(不重复)—长、短程振荡—基线漂移—噪音脉冲尖刺©2008WatersCorporation6关于色谱系统的反压¡什么是反压(backpressure)—流动相流经管路及色谱柱时会有阻力,即所谓的反压,—又称系统反压或系统压力—Waters习惯用的压力单位是Psi(磅/平方英吋)—其它单位有:Bar,Mpa(1Bar=0.1Mpa=14.5Psi)¡影响系统

4、反压的主要因素:—流动相的溶剂组成—温度—流速©2008WatersCorporation7反压与溶剂组成的关系¡流动相的粘度是产生反压的主要原因¡有机溶剂－水的粘度随组成而改变¡其压力随组成变化如下图所示Pressurevs.Organic-WaterPercentage16001400MeOHACN12001000psi8006004002000020406080100PercentOrganicSolvent©2008WatersCorporation8反压与流速的关系¡流速对反压的影响是线

5、性关系¡流速增加，反压亦增大¡下图的实验条件：—2.1×30mmSymmetryC18柱,20℃Pressurevs.FlowRateat20?C500050%MeOH450050%ACN100%H2O4000100%MeOH100%ACN35003000psi250020001500100050000.00.20.40.60.81.01.2mL/min©2008WatersCorporation9反压与温度的关系¡温度对反压的影响是反比关系¡温度升高,反压降低,对某些流动相的影响更大一些Pres

6、surevs.Temperature500050%MeOH450050%ACN100%H2O4000100%MeOH100%ACN35003000psi2500200015001000500010.020.030.040.050.060.070.0Degrees,C©2008WatersCorporation10影响系统反压的其它因素¡反压与色谱柱长度成正比¡反压与填料颗粒度的平方成反比—2.5μm填料比3.5μm填料反压高¡反压与管路直径的四次方成反比(1/D4)¡反压与管路的长度成正比©200

7、8WatersCorporation11HPLC系统压力问题分析(1)¡问题:系统压力高¡可能的原因:—温度太低—流速太高—流动相粘度大—管路堵塞—仪器或色谱柱堵塞—压力传感器问题©2008WatersCorporation12HPLC系统压力问题分析(2)¡问题:压力低或没有压力¡可能原因:—温度太高;流速太低—泵关闭或保险丝断了—泵未输送流动相—系统内有渗漏处—所用溶剂不正确—自动进样器在Purge时卡住©2008WatersCorporation13HPLC系统压力问题分析(2)¡问题:压力

8、低或没有压力¡可能原因:（续）—储液瓶中无溶剂—低压限设置不当—泵未正确排气—溶剂入口过滤头堵—入口管路中有空气—泵失效©2008WatersCorporation14HPLC系统压力问题分析(3)¡问题:压力不稳¡可能原因:—压力传感器问题—泵排气不充分—泵失效—流动相未正确脱气—所用溶剂不混溶或易挥发©2008WatersCorporation15HPLC流路基线噪音问题分析¡基线不稳定(不重复)—检测池中有大的气泡—流路中有小气泡流过—系统未稳定或未达到化学平衡—流动相被污染