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时间:2020-04-12
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1、检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质实验目的:用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质实验原理:某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物,产生特定的颜色反应。实验单位:广州外国语学校组员:曾钰鹏、冯惠贞、陈嘉妍、林诗琪、徐嘉珞实验一:检测还原糖实验材料:苹果、(做可溶性还原性糖鉴定实验,应选含糖高,颜色为白色的植物组织,如苹果、梨。因为组织的颜色较浅,易于观察。)斐林试剂(包括甲液:质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液和乙液)实验用具:解剖刀、研钵、试管、三角架、石棉网、烧杯、酒精灯、小量筒操作方法1.制备组织样液。(去皮、切块、研磨、过滤)苹果或梨组
2、织液必须临时制备。因苹果多酚氧化酶含量高,组织液很易被氧化成褐色,将产生的颜色掩盖。2.取1支试管,向试管内注入2mL组织样液。3.向试管内注入1mL新制的斐林试剂,振荡。应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存,使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂;切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。斐林试剂很不稳定,甲、乙液混合保存时,生成的Cu(OH)2在70~900C下分解成黑色CuO和水;甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应,无Cu(OH)2生成。4.试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中,加热约2分钟,观察到溶液颜色:浅蓝色→棕色→砖红色(
3、沉淀)最好用试管夹夹住试管上部,使试管底部不触及烧杯底部,试管口不朝向实验者。也可用酒精灯对试管直接加热。防止试管内的溶液冲出试管,造成烫伤;缩短实验时间。结论1.可溶性还原糖(如葡萄糖、果糖、麦芽糖)与斐林试剂发生作用,可生成砖红色的Cu2O沉淀。如:葡萄糖+Cu(OH)2葡萄糖酸+Cu2O↓(砖红色)+H2O,即Cu(OH)2被还原成Cu2O,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。实验二:检测脂肪实验材料:花生子叶苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、体积分数为50%的酒精溶液实验用具:解剖刀、载玻片、吸水纸、培养皿、毛笔、显微镜方法方法一:向待测组织样液中滴加3滴苏丹III染液,观察
4、样液被染色的情况。方法二:制作子叶临时切片,用显微镜观察子叶细胞的着色情况具体操作取材:取一粒浸泡过的花生种子,去掉种皮。切片:用刀片在花生子叶的横断面上切下若干薄片,放入装有清水的培养皿制片:从培养皿中选取最薄的切片,用毛笔蘸取在载玻片中央,在花生子叶薄片上滴2-3滴苏丹III染液,染色3分钟(用苏丹IV染液,染色一分钟)用吸水纸吸去染液,再滴加1-2滴体积分数为50%的酒精溶液,洗去浮色,用吸水纸吸去子叶周围的酒精,滴一滴蒸馏水,盖上盖玻片。观察:在低倍显微镜下找到子叶的最薄处,移到视野中央,将物像调节清楚,换高倍显微镜观察,视野中被染成橘黄色的脂肪颗粒
5、清晰可见结论脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色。苏丹Ⅲ在脂肪中的溶解度比在酒精中的溶解度大,当用苏丹Ⅲ的酒精溶液处理含有脂肪的生物组织时,酒精中的苏丹Ⅲ进入脂肪中,将脂肪染成橘黄色。实验二:检测蛋白质实验材料:鸡蛋清、双缩脲试剂(包括A液:质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液和B液:质量浓度为0.01g/mLCuSO4溶液)、蒸馏水、试管。具体操作向试管内注入2ml待测组织样液。向试管内注入双缩脲试剂A液1ml,摇匀。向试管内注入双缩脲试剂B液4滴,摇匀观察试管中出现的颜色变化结论蛋白质与双缩脲试剂发生作用,产生紫色反应。(蛋白质分子中含有很多肽键,在碱性NaO
6、H溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用,产生紫色反应。)
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