电子显微镜的使用与细胞超微结构观察.doc

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1、电子显微镜样品的制备一、透射电镜样品超薄切片常规制作规程1.取材：根据实验Fl的取材，要求部位准确，体积小于2血32.醛类固定：用2%-3%的戊二醛固定2小吋；3.清洗：用磷酸缓冲液清洗3次，每次lOmin；4.娥酸固定:用1%-2%的娥酸固定旷3小时;5・清洗：用磷酸缓冲液清洗3次，每次10min；6.脱水：用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脱水各15min,再用100%乙醇脱水3次，每次30min；7.置换：用环氧丙烷或内酮置换3次，每次30min;8.浸渍:10hr以上，浸渍过程如下：%1内酮：包埋剂=3：

2、1的浸渍液浸渍（动物样lhr,植物样品2"3hr）；%1丙酮：包埋剂=1：1的浸渍液浸渍（动物样品lh「植物样品2"3hr）；%1丙酮:包埋剂二1：3的浸渍液浸渍（动物样品4hr,植物样品12"24hr）；%1纯包埋剂浸渍（动物样品4h「植物样品12^24hr）；9・包埋：将样殆放入盛有纯包埋剂的包埋板屮；包埋剂配方中Epon812,MNA,DDSA,DMP-30的比例见附表10.聚合：将包埋板置于40C、60°C条件下各聚合48hr；11•修块：将包埋头修成梯形，且样品表面积小于0.2mmX0.2mm12.超薄切片:

3、切片厚度50-90nm13.染色：铀染色5、15min清洗铅染色5~10min清洗二、扫描电镜样詁常规制备规程取清固清脱材洗定洗水根据实验H的取材，要求部位准确用磷酸缓冲液反复清洗样品表面的灰尘、杂质等附着物用2%-3%的戊二醛固定2小吋用磷酸缓冲液清洗3次，每次10min用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脱水各15min,再用100%乙醇脱水3次，每次30min；6・置换：用叔丁醇置换3次，每次30min7.干燥:用冷冻干燥仪干燥样品8・粘样：用双面胶带将样品粘到样品台上9.镀膜：用离子溅射仪给样詁镀10mn金

4、膜