微生物学实验吕爱军.ppt

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1、徐州师范大学生命科学学院微生物学实验吕爱军一、实验内容实验一实验室环境和人体表面微生物的检查（3学时）实验二器皿的清洗包装及干热灭菌（3学时）实验三培养基的制备及高压蒸汽灭菌（3学时）实验四细菌的单染色及接种技术（6学时）实验五放线菌的形态观察（3学时）实验六细菌的革兰氏染色及芽孢染色（3学时）实验七细菌大小的测定（3学时）实验八酵母菌形态观察、死活细胞鉴别和数量测定（3学时）实验九温度对微生物生长的影响（3学时）实验十平板菌落计数法及比浊法（6学时）实验十一综合设计性实验（9学时）二、微生物实验安排与考核课程简介：必修课，45学时、

2、1个学分基础实验：80%，10次自主设计实验：20%，设计方案、实验操作、总结、汇报考试成绩按以下公式计算：平时（10％）＋操作考试（20％）＋笔试（70％）三、课堂纪律严格遵守实验室规章制度严肃课堂纪律不允许无故旷课、早退（1次）迟到（2次）工作服四、实验室安全和卫生安全实验室严禁吸烟。注意用水、防电和防火正确使用化学试剂和仪器卫生每次实验需留下6位同学值日，协助保持实验室清洁实验一实验室环境和人体表面微生物的检查一、实验目的1.证明实验室环境与体表存在微生物。2.比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。3.观察不同类群微生

3、物的菌落形态特征。4.体会无菌操作的重要性。二、实验原理平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在合宜温度下培养，1-2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。三、实验材料棉签、平皿（1/1人）、酒精灯、废物缸等四、操作步骤1、写标签：在皿底

4、上2、制培养基3、倒平板4、静置5、接种环境或体表微生物手指（洗前后）、头发、咳嗽、抹布、空气中等6、培养37℃培养24h-48h五、实验报告观察并记录结果，观察环境中细菌菌落形态与类型。1.认识微生物学实验基本材料及其清洗方法；2.了解消毒和灭菌的原理，掌握干热灭菌方法的操作步骤；3.为后续实验做准备。一、实验目的实验二器皿的清洗包装及干热灭菌二、实验内容（一）器皿的种类1．试管（testtube）：制作琼脂斜面、成液体培养基用、制作无菌水用。2．吸管（又称移液管，pipette）：转移液体菌落3．培养皿（petridish）：由正

5、反两平面板互扣而成，专为防治空气中微生物的污染而设计的。在培养皿内倒入适量固体培养基制成平板，用于分离、纯化、鉴定菌种、微生物计数以及抗生素、噬菌体效价等。4．三角烧瓶（Erlenmeyerflask）与烧杯（beaker）：三角烧瓶常用的有100、250、500、1000ml等不同的大小，常用来成无菌水、培养基和摇瓶发酵等。烧杯用来配制培养基和药品。6．载玻片（slide）与盖玻片（coverslip）：用于微生物涂片、染色，作形态观察用。7．接种工具：接种环、针、铲、钩。8.玻璃涂布器。1．新玻璃器皿的洗涤方法：新购置的玻璃器皿含

6、游离碱较多，因在酸溶液内先浸泡数小时。酸溶液一般用2%的盐酸或洗液。浸泡后用自来水冲洗干净。2．使用过的玻璃器皿的洗涤方法:(1)试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯等可用瓶刷或海绵沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后用自来水充分冲洗干净。(2)玻璃吸管吸过血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管（包括毛细吸管），使用后应立即投入盛有自来水的量筒或标本瓶内，免得干燥后难以冲洗干净。（二）玻璃器皿的清洗方法(3)载玻片与盖玻片用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油，要先用皱纹纸擦去或浸在二甲苯内摇晃几次，使油垢溶解，再在洗衣粉水中煮沸5—10

7、分钟。检查过活菌的载玻片和盖玻片，吸过活菌的吸管应先投入盛有2%的来苏水或0.25%的新洁尔灭消毒液中浸泡24h后，按上述方法洗涤。带病原菌的培养物应先行高压蒸汽灭菌，然后将培养物倒去，再进行洗涤。玻璃器皿经洗涤后，若内壁的水均匀分布呈一薄层，表示污垢完全洗净，若挂有水珠，则还需要用洗液浸泡数小时，然后再用自来水充分冲洗。在洁净的载玻片上滴上水滴后应均匀散开。若成水珠状，还应进行充分洗涤。（三）培养皿的包扎培养皿：以旧报纸密密包紧，一般以6套做一包，待灭菌。吸管：在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段1.5cm长的棉花。棉花要塞得松

8、紧恰当（过紧，吹吸液体太费劲；过松，吹气时棉花会下滑），然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸条的的近左端，与报纸约呈60º角，并将右端多余的报纸打一小结。试管的捆扎（四）干热灭菌法1、原理利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固