高效生长激素试剂.doc

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1、生长激素试剂概述生长激素（HGH）分子量，21500道尔顿，由带有2个二硫键的191个氨基酸的单链组成。是由垂体前叶细胞合成的一种蛋白激素。在婴儿期HGH缺乏可引起低血糖，在儿童期引起身材矮小。儿童期HGH过量很少见，但如果存在，可导致超长身材或巨人症。成人HGH过量引起肢端肥大症，这可以是HGH本身产生过量，也可以是异位释放因子过量，如胰腺肿瘤。HGH受下丘脑分泌的生长激素释放因子作用，以脉冲方式由垂体释放到循环中，在慢波睡眠开始阶段HGH有一个正常脉冲。非常特异应激素也能引起HGH升高。激烈运动和一些药物刺激也会引起HGH升高。因为HGH是脉冲式释放，一个孤立的血清HGH

2、结果通常是没有价值的。新生儿的随机HGH水平若连续超过10ng/ml时，则不存在HGH缺乏。在支端肥大症病人，若随机HGH水平持续高于10mU/L（相当于5ng/ml，可以支持诊断。原理本剂用双抗体夹心酶标免疫法，测定人血清中的HGH含量。试剂盒中使用的两个独立物异性抗体是否由HGH分子不同的抗原决定族制备而得。其中一个抗体用于包被反应板，制成固相抗体，而另一个抗体制备成酶标抗体辣根过氧化物酶结合物溶液。若检测物中有HGH，则同时与酶标抗体与固相抗体反应，形成“固相抗体——抗原——酶标抗体复合物，”并结合在微孔表面，洗去多余的酶标抗体，加底物显色，再加上终止液反应，用酶标仪在

3、450nm波下测吸光度。试剂组成1、微孔反应板：2-8℃干燥保存，有效期内保持稳定。2、酶结合物：一瓶，2-8℃保存，有效期内保持稳定。3、标准品：6瓶，浓度分别为0，2.5，5，10，25,50ng/ml，2-8℃保存，有效期内保持稳定。4、显色A：2-8℃保存，有效期内保持稳定。5、显色B：2-8℃避光保存，有效期内保持稳定。6、洗液：一瓶，使用前用蒸馏水稀释10倍，2-8℃保存，有效期内保持稳定。7、终止液：一瓶，7ml，2-8℃保存，有效期内保持稳定。标本采集1、标本为人血清,血浆或再钙化的血浆.2、血清标本须由用标准静脉穿刺技术采集的全血中分离得到。3、标本中含水有

4、导致实验结果不一致。分析前须将标本澄清。4、含有大量的脂血、溶血或浑浊的血清不能使用。5、若24小时内进行实验，血清可存放于2-8℃，若不需及时实验，血清应在-20℃条件下保存，避免反复冻融。注意事项:1、实验室水箱温度:37℃,实验前必须检查.2、实剂从冰箱取出后，放室温平衡15分钟，实验过程中室温18-20℃3、定期检验移液是否准确。4、严格按说明书操作，不同批号试剂不得混用，不要混肴试剂瓶盖。5、每次实验必须带1-2个质控血清，加样后轻摇微孔条，一定要充分混匀，实验结果必须是质控血清在质控范围内，方可发报告。6、注意洗板时间，每次洗后需拍干后再洗杜绝连续冲洗；无洗板机时

5、，最好用振荡器洗板，确保质量，若冲洗不净会影响结果。1、酶标仪测定前需提前预热，经调“0”重复结果后再测定样品，最好每次测一空板，避免仪器内有液体未被发现时影响结果。2、六项指标相互关联，遇异常情况及时临床联系，查询病员是否服药等特殊情况。3、试剂使用后应及时放回冰箱。4、显色B存取时，应避免光线直接照射。5、未用完的微孔板放在封口袋内保存。操作步骤1、将所需用量的微孔条放置在支架上；2、反应孔中依次加入50ul标准品和待测标本；3、每孔加入50ul酶结合物，轻轻振，充分混匀；4、在37℃水浴箱或温箱中温育30分钟；5、将各孔液弃尽，用洗液冲洗五次,并拍干;6、每孔加1滴显色

6、液A及1滴显色液B,充分混匀;在室温(18-25℃)下避光反应15分钟;7、每孔加1滴终止液,并混匀;8、用酶标仪在450nm波长下读记吸光度；9、反应终止液后的30分钟内记录各反应孔OD值。结果计算1、在普通坐标纸上，以标准品吸光度对各个标准品浓度作图，吸光度值作Y轴，浓度作X轴画出标准曲线。2、在标准曲线上查出待测标本浓度。3、所有稀释的标本需乘以相应的稀释倍数来进一步推算其浓度.正常值范围每个实验室都应根据测定的方法及人群体间的差异建立自己的正常值范围。以下正常值为本公司提供的参考值：一般成人HGH≤10ng/ml，女性平均较男性偏高。实验限度1、HGH酶免检测试剂盒仅

7、用于测定血清、血浆或再钙化的血浆标本。2、实验操作中冲洗不充分可能影响实验结果，因此在每一遍冲洗前彻底甩干微孔中残留的洗液3、本实验结果仅供临床医生参考，不能作为诊断的唯一依据。质控血清参考值L-I5.0(4.0-6.0)ng/mlL-Ⅱ25.0(20.0-30.0)ng/ml