实验五 DMEM培养液的配制.ppt

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1、实验五DMEM培养液的配制【能力目标】熟练掌握DMEM细胞培养液的配制。500mL大烧杯玻璃棒250mL/500mL盐水瓶酸度计50mL小烧杯3个孔径0.22μm微孔滤膜一次性滤器一次性滤纸去离子水灭活的小牛血清DMEM干粉青霉素链霉素NaHCO3超净工作台磁力搅拌器电子天平药匙【实验材料】DMEM干粉1瓶(1,000mL量)NaHCO33.7gL-谷氨酰胺0.2g超纯水1,000mL【配方】取清洗干净的500mL大烧杯一个，加入新鲜制备的三蒸水约300mL，加热至15~30℃；将DMEM干粉袋竖立轻弹，使袋中粉下沉，剪开袋口

2、，将干粉倒入500mL的大烧杯中，用超纯水冲洗袋2~3次；放入清洗干净的磁子，在磁力搅拌器充分搅拌，以确保培养基干粉充分溶解；【配制方法】根据配方要求，加入准确称取的NaHCO31.85g，L-谷氨酰胺0.1g，充分摇匀至完全溶解；加入已经制备好的双抗溶液，使青霉素和链霉素的最终使用浓度达到100μg/mL；加入培养基总体积约10％的已灭活的小牛血清；【配制方法】用浓度为7.4％的NaHCO3溶液调整溶液的pH值为7.2~7.4，加超纯水定容，并将培养液转入盐水瓶；用一次性滤器过滤上述培养液到灭菌的盐水瓶，封口，4℃保存备用。

3、【配制方法】实验五1MHCl的配制1MNaOH的配制250mL烧杯玻璃棒250mL盐水瓶一次性滤纸去离子水电子天平药匙5mL移液器5mL吸头NaOH浓HCl【实验材料】用5mL的移液器准确移取盐酸21mL，加入到279mL超纯水中。【HCl的配制过程】【NaOH的配制过程】NaOH10g超纯水250mL边加边搅拌，溶解过程会产热。【课程安排】1、每组确定本组的D-Hank’s液是否有？是否已过滤除菌；2、每组的EDTA需要高压灭菌；3、需要配制新鲜的1MHCl和1MNaOH溶液，以及7.4％的NaHCO3溶液；4、需要重新灭菌

4、5mL枪头；5、每组准备一铝饭盒，内放小剪刀一把，小镊子一把，手术钳一把，大剪刀一把，高压灭菌；【课程安排】6、每组准备培养皿两套，干烤灭菌；7、需要重新配制双抗溶液。