山羊痘抗体（Pox-Ab）试剂盒使用说明书.doc

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1、山羊痘抗体(Pox-Ab)试剂盒使用说明书                    本试剂盒仅供研究使用使用目的：山羊痘抗体试剂盒用于测定山羊血清、血浆及相关液体样本中山羊痘抗体(Pox-Ab)含量。实验原理山羊痘抗体试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中山羊痘抗体(Pox-Ab)水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入山羊痘抗体(Pox-Ab)，再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下

2、转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的山羊痘抗体(Pox-Ab)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中山羊山羊痘抗体(Pox-Ab)浓度。山羊痘抗体试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7终止液 6ml×1瓶 2酶标试剂 6ml×1瓶 8标准品(120pg/ml) 0.5ml×1瓶 3酶标包被板 12孔×8条 9标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4样品稀释液 6ml×1瓶 10说明书 1份 5显色剂A液 6ml×1瓶 11封板膜 2张 6显色剂B液 6ml×

3、1/瓶 12密封袋 1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。山羊痘抗体试剂盒操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。2.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μ

4、l，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：

5、每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止60pg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 30pg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 15pg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 7.5pg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 3.75pg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入1

6、50μl标准品稀释液 液后15分钟以内进行。山羊痘抗体试剂盒注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀

7、释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：2-8℃。2．有效期：6个月