食品微生物检验学实验.doc

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1、《微生物检验学》教学实验通过教学实验，了解食品检验中微生物检测部分的基本方法，要求学生通过实践操作的训练，掌握食品检验中微生物检测技术的基本操作技能。熟练掌握培养基配制、高压蒸汽灭菌技术、无菌操作技术和菌数计数、生化鉴定等技术，使学生具有较强的实际操作能力。【目的要求】1.熟练掌握培养基制备与灭菌、无菌操作技术2.掌握细菌菌落计数方法3.掌握大肠菌群的识别与分离技术【实验内容】1．培养基制备与灭菌2．水质的取样和制备（无菌操作技术）3．细菌菌落总数的计数与结果分析4．大肠菌群的初发酵试验与分离培养5．大肠菌群的革兰氏染色、复发酵试验和结果分析【实验方法】一、培养基制备与灭菌1.学生分为

2、若干组，每组配备一套培养基、并经高压锅蒸汽灭菌。2.学生独立完成玻璃器皿的包扎和干热灭菌二、水样的采集与制备1．采集实验室的自来水样2．采集自来水制备的水源水（闽江水）和校内观音湖水样三、细菌菌落总数测定（标准平板活细胞计数法，SPC）1.水样的稀释、制备和培养2.细菌菌落计数方法3.细菌菌落计数的报告四、大肠菌群检验：1.生活饮用水或食品厂生产用水的检验2.水源水（闽江水）和校内观音湖水水样（1）初步发酵试验（2）分离培养（3）证实试验（4）根据证实为大肠菌群阳性的管数，查表计算出大肠菌群最可能数。五、写出水质检验的结果，并评价所检测的水质质量状况。5水质卫生检验一、水样的采集1.自

3、来水先将水龙头用清洁布拭干，并用摄子夹消毒棉花沾酒精灼烧水龙头3min灭菌，再打开水龙头使水流5min后，以灭菌的三角瓶或生理盐水瓶接取水样，以待检测。2.池水、河水或湖水应取距水面10～15cm的深层水，先将灭菌的带塞的玻璃瓶瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去瓶塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞塞好，再从水中取出，最好立即检验，否则需放入冰箱保藏。二、细菌菌落总数测定（SPC）1.样品稀释与制备（1）自来水：用灭菌吸管吸取1mL水样，注入灭菌的培养皿中，共做两个平皿。然后倒入约15mL已溶化并冷却至45℃左右的营养琼脂培养基，并轻轻摇晃，使水样与培养基充分混匀。待冷却后倒置于36±1

4、℃培养24h，进行菌落计数。（2）池水、河水或湖水等：用无菌吸管吸取检测水样1mL于第一支9mL生理盐水试管中，摇匀，再从第1支稀释试管中吸取1mL于第2支生理盐水的试管中，如此类推，做成一系列的稀释液。一般稀释度可选择为10-1、10-2、10-3、10-4，若水样混浊或污染严重的可再进一步稀释至适宜稀释度。自最后三个稀释度的试管中各吸取1mL稀释液于培养皿中，每稀释度做二个平皿，倾注入约15mL已溶化并冷却至45℃左右的营养琼脂，并轻晃平皿，使之混匀，待冷却后倒置于36±1℃培养箱中培养24h。　2.菌落计数方法待平皿培养24h长出菌落后作平皿菌落计数，可用肉眼观察，必要时用放大镜

5、检查，以防遗漏，在记下各皿的菌落数后，求出同稀释度的2个平皿的平均菌落数。3.菌落计数的报告：①平皿菌落数的选择：选取菌落数在30～300之间的平皿作为菌落总数测定标准，一个稀释度使用两个平皿应采用其平均数，其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，则可计算半个平皿后乘2以代表全皿菌落数。②稀释度的选择：　a.应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见表例1)。b.若有两个稀释度，其生长之菌落数均在30～300之间，则应视二者之比如何来决定，若其比值小于2

6、，应报告其平均数：若大于2则报告其中较小的数字(见表例2及3)。c.若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表例4)d.若所有释稀度的平均菌落数均小于30，则应按稀释倍数最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表例5)。e.若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表例6)。f.若所有稀释度均无菌落生长，则以小于(＜)1乘以最低稀释倍数报告之(5见表例7)。　　　　　　　　　　　　细菌菌落总数计算方法（SPC法）例次不同稀释度平均CFU两稀释度C

7、FU之比菌落总数报告CFU/mL(g)备注10-110-210-31135616420－16400或1.6X104两位以后的数字采用四舍五入的方法去舍。22760295461.637750或3.8X10432890271602.227100或2.7X1044＜30001650513－513000或5.1X105527115－270或2.7X1026无法计数30512－30500或3.5X1047000＜10③菌落数的报告：菌落数小于10，按＜1