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时间:2020-03-20
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1、PTC尝味实验和X染色质的观察[目的]掌握人类X染色质的形态特征及X染色质标本的制作方法。通过对人类尝味能力的分析,能初步运用遗传学的基本规律解释一些遗传现象。[材料和仪器]1、载玻片、显微镜、消毒牙签、吸水纸、擦镜纸、长吸管;2、各种浓度的PTC溶液、固定液、0.2%甲苯胺兰、香柏油。[原理]1.人类X染色质的检查人类的性别,可以通过性染色质鉴别,还可以从体细胞核内的X染色质、Y染色质进行鉴别。正常女性的间期体细胞核中,有一紧贴核膜内侧、直径约为1um的椭圆型深染小体,称X染色质,又称X小体或Barr小体。
2、为什么正常男性没有X染色质呢?Lyon假说(1)剂量补偿:正常女性的两条X染色体中,只有一条有转录活性,另一条X染色体无转录活性,这条失活的X染色体在间期细胞核中螺旋化呈异固缩状态,形成X染色质,这样男女X连锁基因产物在数量上就基本相等。(2)失活发生在胚胎早期:异固缩发生于人胚第16天,此后,分裂所产生的细胞,都保持同样的失活特点。(3)随机失活:异固缩的X染色质可以来自父亲,也可以是来自母亲,失活是随机发生的。[操作]1、涂片:用消毒牙签从女性口腔两颊部稍用力刮取黏膜上皮细胞,迅速涂抹于载玻片上(涂片时只
3、能从左到右或从右到左,切勿来回涂抹)。2、固定:立即加新配制的固定液(甲醇3:冰乙酸1)4至5滴,固定15分钟。3、染色:用0.2%甲苯胺兰染液染色4分钟。4、冲洗:用自来水缓缓冲洗玻片标本数秒钟,除去染液,晾干后,用显微镜观察。5、观察:低倍镜下寻找合适区域后,转换油镜观察。[结果观察]X染色质紧贴在核膜内缘,形态为一结构致密而染色较深的,轮廓清楚的小体。其形态一般呈圆形、三角形或卵圆形等,直径为1微米左右。X小体的形状2、PTC尝味实验苯硫脲(简称PTC)是一种白色结晶状药物,由于含有N—C=S基团,故有
4、苦涩味。有的人能尝出其苦味,称为PTC尝味者,这决定于显性基因T的存在,有的人几乎不能尝出苦味,称为味盲。这对基因位于人类的第7号染色体上。在我国汉族人群中,味盲约占10%。在PTC尝味者中,TT的个体尝味能力较高,而杂合型Tt的个体尝味能力较低。味盲tt的个体尝味能力较低,只有在PTC的浓度大于7号PTC溶液浓度时,才能尝出其苦涩味,有的甚至连PTC粉末结晶也尝不出苦涩味。人类对苯硫脲的尝味能力,属于不完全显性遗传。[操作]检查时,每个人从最低浓度的PTC溶液开始(11号),用滴管吸取少量溶液,滴1~2滴在
5、受检查者的舌根部进行检查,从低浓度到高浓度顺次尝味,直至感觉到有明显的苦涩味为止。并记录下自己能尝出的PTC浓度,然后推算出自己属于哪种基因型,一般认为,尝味阈值≥11号味纯合尝味者(TT),尝味阈值<7号为味盲(tt),尝味阈值在10~7号为杂合尝味者。[作业]1、画一典型的口腔粘膜上皮细胞,标出X染色质。2、PTC尝味实验后,写出自己的基因型。
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