生物：11《大肠杆菌的培养和分离》素材（2）（浙科版选修1）.doc

《生物：11《大肠杆菌的培养和分离》素材（2）（浙科版选修1）.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、第1节大肠杆菌的培养和分离一、培养基的配置：我们用牛肉膏蛋白腺培养基来培养大肠杆菌。配置1000ml的培养基（可由教师在实验前配置好，也可由学生分小组后在实验课上操作）。1、配方：牛肉#5g蛋白豚10gNacl5g琼脂20g2、称量：准确称取各成分。3、溶化：加热熔化，用蒸徭水定容到1000mLo整个过程不断用玻棒搅拌，li的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。4、调pH：用lmol/LNaOH溶液调节pH至7.0——7.2。5、灭菌：将配置好的培养基转移到锥形瓶屮，加上棉塞，包上牛皮纸，用皮筋勒紧，集屮放入高

2、压灭菌锅内，121摄氏度、100千帕压力下灭菌15min05——8套培养111L用I口报纸包作一包，于干热灭菌锅内160——170°C条件下灭菌2小时。6、倒平板：灭菌后，待固体培养基冷却至50°C左右时在洒精灯火焰附近操作进行。其过程是：①将灭过菌的培养川［放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；%1右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。倒过来放置的目的是防止培养基冷

3、却过程屮形成的水滴落到培养基表面。向培养川［屮转移已灭菌的培养基时，也不要把培养基沾在皿壁上。否则，空气屮杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。二、大肠杆菌的接种、培养：1、接种常川的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。(1)平板划线法:%1操作步骤：将培养皿底部用拇指和无名指固定成倾斜状态，在火焰旁将培养1U1稍微打开。在此同时，用坏状接种针在火焰旁取少许菌悬液,迅速送入培养1111内，在平板培养基的一边,作第1次平行划线3〜5条，转动培养川1•约70°角，用烧过冷却的接种针，通过第1次划线部分

4、作第2次平行划线，然后再用同样方法，通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行•划线部分作第四次平行划线。划线时，接种针应与平板表面成30°角左右。不要使接种针碰到培养皿边缘，也不要将培养基划破。划线完毕后，盖上皿盖，倒置于恒温箱培养。%1该方法原理及其注意事项：用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养肌平板上划线，在划线过程屮菌液逐渐减少，细菌也逐渐减少。划线到最后，可使细菌间的距离加大。在培养10〜20h后，可由一个细菌产生单菌落，菌落不会重叠。如果再将毎个菌落分别接种至含有固体培养基的试管

5、斜面上，在斜面上划线，则每个斜瓯的菌群就是由一个细菌产生的后代。取菌种前灼烧接种环的目的是消灭接种环上的微生物；除第一次划线外，其余划线前祁要灼烧接种环的目的是消灭接种环上残留菌种；取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是防止高温杀死菌种；战后灼烧接种环的目的是防止细菌污染环境和操作者。(2)稀释涂布平板法：先将培养的菌液稀释，通常稀释到IO"〜10-7Z

6、TiJ,然麻取0.1ml不同稀释度的稀释菌液放在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养，在适当的稀释度下，可产生和互分开的菌

7、落。通常毎个培养川L有20个以内的单菌落最为适合。将毎个菌落分别接种在斜面上扩增培养后，再做功能性实验。2、培养：将接种后和未接种的培养基都放入37°C恒温箱中，培养12小时和24小时后，分别观察记录结果。三、实验评价相关问题：1、未接种的培养基是否有菌落？如果有，为什么？2、接种了大肠杆菌的培养基上是否有菌落？其颜色、形状、大小是否相同？3、如果培养基上出现了不同的菌落，请分析可能的原因。四、实验注意事项：①实验屮用的棉花不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸水示容易造成污染。灭菌示，通常在60〜80°C烘箱

8、屮除去灭菌时的水分；%1物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌麻，要首先打开排气阀，点沸并排除锅内冷空气，其目的是有利于锅内温度升高，随麻关闭排气阀继续加热，加热结朿切断热源麻，要使温度白然降低，气压务必降至零时打开锅盖，其目的是防止容器屮的液体暴沸；%1在用任何器皿转接时，瓶塞和封膜只能夹在手上，不许放在台面上，接种时要在酒精灯火焰旁操作；%1培养基一定不能沾在三角瓶口、试管管口和培养1111壁上，否则容易污染；%1接种时要胆大心细，动作快捷，这是减少污染的关键；%1接种麻，培养皿必须倒放（盖在下方）在恒温培养箱中

9、，如正放则水蒸气在盖上凝成水滴，滴到接种示的培养基表而，水流扩散会使菌落扩散，就很难形成单菌落w.w・W・k・S・5・u.c.o.m