拓展视野　历史不能忘记中国对PCR的贡献.ppt

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1、历史不能忘记中国科学家对PCR的贡献穆利斯(K.B.Mullis)荣获1993年诺贝尔化学奖PCR是穆利斯一个人的功劳吗？PCR全称：聚合酶链式反应WhydoPCRHowtoPCRWhatisPCRWhydoPCR转基因技术犯罪鉴定亲子鉴定WhydoPCRWhydoPCR古生物学肿瘤诊断WhydoPCR2015年9月，MITTechnologyReview杂志发布了“2015年度十大突破技术（BreakthroughTechnologies2015）”，与肿瘤个性化医疗密切相关的“液体活检（LiquidBiopsy）”名列其中。知识回顾

2、WhatisPCR1.变性（90℃-95℃）双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成________氢键单链DNA2.复性(55℃-65℃)温度降低，与DNA模板结合，形成局部______。双链引物3.延伸（70℃-75℃）在的作用下，连接，合成与模板互补的DNA链。脱氧核苷酸Taq酶PCR过程DNA模板引物（一对,单链的DNA或RNA）Taq酶（热稳定性DNA聚合酶）4种游离的dNTPPCR条件WhatisPCR拓展思考第几次会出现目标DNA？WhatisPCR1移液（在0.5mlPCR管内配置20ul反应体系）2混合（盖严，用

3、手指轻轻弹击管壁）3离心（将微量离心管放在离心机上）PCR的实验操作HowtoPCR(1)94℃预变性5min，(2)94℃变性30s，(3)52℃退火30s，(4)72℃延伸1min。(5)重复(2)-(4)30次（6）72℃延伸1min。4反应将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循环程序HowtoPCR拓展思考1操作过程中如何防止污染？2如果没有PCR仪，提供3个恒温水浴锅和计时器，你能成功进行体外DNA扩增么？HowtoPCRHowtoPCRDNA的检测可以通过测量DNA含量来评价扩增的效果，DNA在260nm的紫外线波段有一

4、强烈的吸收峰，峰值的大小与DNA的含量有关DNA含量测定紫外分光光度计（1）稀释2µLPCR反应液，加入98µL蒸馏水，将样品进行50倍稀释（2）对照调零以蒸馏水作为空白对照，在波长260nm处，将紫外分光光度计的读数调节至零取DNA稀释液100µL至比色杯中，测定260nm处的光吸收值（3）测定DNA含量（g/mL）＝50×(260nm的读数)×稀释倍数（4）计算在厚度为1cm比色杯中，OD260=1相当于50g/ml的双链ＤＮＡ。1PCR技术的操作步骤依次是()A.高温变性、中温延伸、低温复性B.高温变性、低温复性、中温延伸C.

5、中温延伸、高温变性、低温复性D.中温延伸、低温复性、高温变性2PCR技术中，引物的作用是()A．打开DNA双链B．催化合成DNA子链C．使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始复制D．提供模板活学活用BC变式训练2在PCR实验操作中,下列说法不正确的是()A.向微量离心管中添加各种试剂时,只需一个枪头B.离心管的盖子一定要盖严,防止液体外溢C.用手轻弹离心管壁的目的是使反应液充分混合D.离心的目的是使反应液集中在离心管部,以提高反应效果解析:向微量离心管中添加各种试剂时,每吸取一种试剂后,移液器上的枪头必须更换,以确保实验的准确性。答案:A

6、3做PCR使用的微量离心管、枪头、缓冲液及蒸馏水使用前必须进行的关键步骤是A反复洗涤B不怕外源DNA污染C高压灭菌D在—20℃储存C