华中农业大学开题报告.ppt

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1、小檗碱影响断奶仔猪肠道区系的研究研究生：导师：日期：主要内容立题依据和意义研究内容设计路线试验方案研究进度安排一、立题依据和意义小檗碱（berberine，Ber）又名黄连素，属于季铵型异喹啉类生物碱，主要存在于小檗科、罂粟科、毛莨科、芸香科和防己科等植物中(何苗等,2012)。小檗碱在乙醚中可析出黄色针状晶体，熔点为145℃，不溶于水，难溶于苯、乙醚和氯仿，其盐类在水中的溶解度比较小。分子式为[C20H18NO4]+，分子量为336.37，结构如图1所示小檗碱具有广泛的抑杀细菌作用。Amin等测试了多种微生物对小檗

2、碱的敏感性（表1）小檗碱的研究进展郑红艳(2004)通过MOPAC/PM3方法优化，用Sybyl6.91软件进行分子叠加，发现小檗碱与喹诺酮类药物立体结构叠合较好，推测其可能有相同的抑菌作用机制。小檗碱的研究进展小檗碱的季铵结构是抑菌活性所必须的结构，且C2、C3位上2个亚甲二氧基能够增强抑菌活性(郑多燕,2004)。小檗碱的研究进展小檗碱的研究进展小檗碱能抑制细菌内糖代谢过程中的丙酮酸氧化，使细菌对维生素B6和烟酰胺等的利用受限制，产生抑菌作用（李仁利，2004）。小檗碱能通过抑制细菌内的DNA、ＲＮＡ、蛋白质和类

3、脂的合成，从而干扰细菌的繁殖（张明发，2003）。小檗碱的研究进展孟甄等（2003）用含新霉素、小檗碱等的培养基连续传代培养大肠杆菌，结果在含新霉素条件下很容易出现耐药性菌株，而小檗碱组则没有出现耐药性菌株。小檗碱对肠道对肠道常驻菌有弱抑制作用，其中对有害肠菌有较强的的抑制作用，而对乳酸菌等肠道常驻菌抑制作用较弱（Chae,1999）。小檗碱的研究进展断奶仔猪日粮中添加三颗针提取物（有效成分主要为小檗碱）能减少仔猪腹泻、提高仔猪生长性能，达到或超过添加土霉素的促生长效果；与添加抗生素相比，三颗针提取物能改善断奶仔猪的

4、免疫力，提高仔猪的特异性免疫和非特异性免疫机能，调节仔猪的肠道菌群，增加肠道乳酸杆菌和厌氧菌的数量，降低大肠杆菌和需氧菌的数量，提高肠道VFA的浓度（刘岭，2006）。小檗碱的研究进展小檗碱可消除细菌的耐药质粒。在体外细菌培养和小鼠体内注射小檗碱，均可使多重耐药性痢疾杆菌的耐药质粒消除(杨春梅等,2000)。小檗碱能够穿透磷脂双分子膜和金葡萄球菌细胞膜，是一种穿透性阳离子和多药耐药泵作用物(Severinaetal.,2001)。小檗碱的其他药理作用小檗碱及其衍生物药理功能十分丰富，除抗菌、抗疟等活性外，小檗碱及其衍

5、生物还具有抗病毒、治疗肿瘤、心血管疾病、降糖、调脂等多方面药理活性作用（张韶湘等，2007）。研究目的与意义在实际生产中，断奶仔猪处于断奶（心理）、更换饲料（营养）双重应激，也是疫苗的集中免疫期和疾病的多发期。本试验通过在断奶仔猪饲料中添加小檗碱，研究其对仔猪肠道区系的影响，以期评估小檗碱作为潜在新型饲料添加剂的价值。二、研究内容在21日龄断奶仔猪日粮中添加小檗碱，研究小檗碱对断奶仔猪肠道区系的影响。通过对试验仔猪血清生理生化指标、腹泻率、腹泻指数、肠道HE染色肠绒毛高度、肠道微生物区系（高通量测序）的分析，评估小檗

6、碱在断奶仔猪日粮中使用价值。三、技术路线40头仔猪随机分为A、B、C、D四组，每组10头A组仔猪不断奶B组21日龄断奶日粮不加小檗碱另外C、D两组分别在日粮中添加高、低两个浓度的小檗碱试验期2周，测定指标：血清生理生化指标，腹泻率，腹泻指数，肠道HE染色肠绒毛高度，肠道微生物区系（高通量测序）四、试验方案选取40头杜×（长×大）仔猪，随机分成4个处理组，每个处理组10头仔猪。分组情况如下：处理组一：21日龄不断奶；处理组二：21日龄断奶，仔猪基础日粮不加小檗碱；处理组三：21日龄断奶，仔猪基础日粮加低剂量小檗碱(30

7、0mg/kg)；处理组四：21日龄断奶，基础日粮加高剂量小檗碱(500mg/kg)。试验期14天。试验期管理试验仔猪除接受处理日粮外，其他饲养管理、日常消毒和免疫程序均按规模化猪场统一执行。测定指标在试验期第7d和14d每组随机抽取3头仔猪屠宰。采血，采集10ml血样，室温下静置3-4h后3500r/min离心15min，制备血清-20℃保存备用；取肠道内容物和小肠组织样样品于-80℃保存。测定指标2、腹泻率每天8:00时定时观察仔猪粪便情况，粪便分为正常、稀软、粘稠、水样和血便5各等级，后四个等级为腹泻，记录每组腹

8、泻头次。腹泻率=试验期腹泻仔猪头次／(试验仔猪头数×试验天数)×100％1、血清生理生化指标对血清样品进行血常规测定。测定指标3、腹泻指数M.Castillo,2008测定指标5、肠道微生物区系对肠道内容物样品进行高通量测序，分析肠道菌群区系。4、肠道HE染色长绒毛高度各肠段样本采用石蜡切片，苏木精-伊红染色，在光学显微镜下进行观察、采图和测量