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1、.第17卷第3期色谱Vol17N0.31999年5月CHINESEJOURNALOFCHROMATOGRAPHYMay1999文献综述亲和色谱法的进展‘张津辉蒋中华陈惠鹏马立人(军事医学科学院放射医学研究所北京100850)提要概述了亲和色谱法分离机理、色谱填料及其应用的新进展,着重介绍了亲和固定相中配基发掘的新途径。全文包括6篇文献。关镇,,词亲和色谱法配基分离纯化分类号06581前言论上讲几乎所有具有相对特异性和一定亲和力的两亲和色谱法是根据生命现象中生物大分子间高种分子均可用于亲和色谱。近期报道的例子有以单-亲和力与高专一性可逆
2、结合而设计的一种独特的色克隆抗体为配基纯化RNA聚合酶(RNApoly。merase)、tptn谱分离方法近年来随着色谱理论的深入研究和色以复制蛋白A(renlicaionroeiA)为配,se、谱技术的飞速发展亲和色谱法的理论和应用都有基纯化解旋酶(hehca)以延伸因子Tu(elongation。faetoru[8一‘,〕。T长足的进展T)为配基纯化转移RNA等,2分离机制的探索在充分利用天然亲和作用的同时对天然配基关于生物大分子在亲和色谱法中的保留机理及的功能表位进行人工模拟形成了生物模拟亲和色谱oetieanityeroatg
3、raph,。〕。色谱过程数学模型的研究一直是一个相对薄弱的环(bimimffihm6y)〔这一类配,、、、节这主要是因为对生物大分子间亲和结合的机理基包括染料脚〕氨基酸类似物图〕多氟毗咤卿〕金属,一2司〕。及特点了解得不透彻而且目标分子在两相间分配离子赘合剂图及琉基化合物勿等它们制备容系数过大且在固定相上的吸附等温线多不呈线易,造价低廉,稳定性好,尤其适用于大规模重组蛋,,,;另外;性[lj在实际操作中往往样品成分复杂并且白质的生产与蛋白质或核酸的结合机理更为明确柱子呈过载状态。传统的观念认为亲和色谱实际上通过设计合适的吸附与洗脱条件
4、,可进行多元组分是,。一种只能起组分分离作用的选择性过滤法这种分离,而且也解决不了除了化学合成模拟外,还可看法不仅不能定量描述色谱过程以对蛋白质类配基多。[z.3〕〕3。〕。元组分分离的问题对一些亲和力较弱或结合进行化学修饰[2s或从基因水平方面进行改造琳[’,s〕机制相对简单的亲和色谱的定量研究可以为上组合化学及群集筛选技术也应用于亲和色谱配基的述间题的解决提供一些有益的经验。选择。应用噬菌体抗体库技术,理论上可以筛选任意亲和色谱法机制的探索归根到底都有赖于固定一种化合物的抗体[3l〕,包括那些不能用常规方法对相。;同理也可用噬菌体
5、肤库法筛上的配基和目标分子之间作用的深入研究早期动物进行免疫的物质的亲一〕。和色谱理论中配基配体亲和作用的研究都是选与任意氨基酸序列结合的肤段[32应用体外分子。S建立在均相反应和宏观平衡态热力学的基础上的进化方法相关的ELEx(systematicevolutionof,ansexponentiaenricent实际上亲和色谱中涉及到的亲和作用都是非均相ligdbylhm)可以筛选与任意,,;另外生物大分子的空一种物质特异结合的核酸分子反应并且常常是多元体系以用于分离或检。’。34〕间取向及运动方式也对其亲和作用有重要影响近测[a,
6、期一些文献报道了这方面的一些研究如固相DNA随着对生物分子间作用机制的深入认识和计算闭,,n。杂交动力学的研究从分子动力学的角度研究蛋化学的发展亲和作用系统的人工从头(deov)设白之间的识别等[v]。计已成为可能。受互补核酸的启发,人们设想互补核,3配基的选择酸片段编码的肤链也应具有亲和作用实际上果然,。,」生物分子间的识别与结合是普遍存在的从理存在这种现象哪除了从核昔酸序列推测外还可医药卫生科研基金(9305046)资助课题:一一,:一一收稿日期19980412修回日期19980709254谱17卷以从头设计具有亲和作用的肤段[s
7、6〕。特别值得一提离,亲和色谱显得更为重要。例如血液学界普遍采用,oeeua:imprintng)的是分子印迹技术(mlli可以像的分离造血干细胞的磁性亲和细胞分选系统(MA〕。制造模具一样直接用化学法制造与任意分子互补结CS)实质上也是亲和色谱法的演变哪,,合的配基用此法可制备人工抗体用于毒物的检测在很多微量生物活性物质的分析工作中为了,37。,或制备手性固定相用于HpLc[s]提高待检测物浓度或去除一些干扰成分常常先用上面是从配基的角度进行讨论。在基因工程重一些亲和吸附剂处理样品使待检物质浓集后再用,一一。,组蛋白的生产中为了提高
8、表达量和方便后续的纯HPLCMS等方法进行分析哪川更加奇妙的是,,化工作也经常对目的蛋白进行改造称为亲和标还可将抗体偶联于基质辅助解吸激光飞行时间质谱记一川.一S一,,咖如与谷胧甘肤转移酶融合表达的外源的探头上捕获目标物
