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《鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏实验》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏实验随着养鸡业集约化、产业化的不断发展，疾病越来越多，细菌对抗生素的耐药性越来越强，在临床疾病防治工作中，要取得较好的治疗效果，需要选择对致病菌比较敏感的药物來述行预防和治疗，达到有效控制疾病的目的。为了控制鸡大肠杆菌在鸡群中的传播，我们对送检的疑似大肠杆菌病例迓行病原的分离鉴定，并对分离菌的培养特性、致病力及抗菌药物的敏感性进行了研究，为有效防制鸡大肠杆菌病提供了依据。关键词:大肠杆茵;分离鉴立;药敏1材料1.1病料来源采自鸡场150〜200日龄有典型气囊炎、肝包膜炎、心包膜炎和败血症的病死蛋鸡的肝脏、脾脏、心血等。1.2培养基普通琼脂培养
2、基与普通肉汤培养基［LB培养基：固体：胰蛋白豚l.Og加入酵母提取物0.5g、NaC10.5g,^琼月粉1.5g使其充分溶解，高压灭菌20min,铺板并保存于4°C”。液体:胰蛋白月东l.Og加入0.5g酵母提取物、0.5gNaCl,然后定容至100ml,高压火菌20min,4°C保存］麦康凯琼脂培养某水解酪蛋白（MH）培养基三糖铁琼脂（蛋白腺20g,牛肉浸膏5g,乳糖10g,蔗糖10g,葡萄糖lg,NaCL5g,硫代硫酸钠0.2g,硫酸亚铁0.2g,琼脂粉20g,加热溶解后PH调至7.4加入（）.4%酚红水溶液6.3ml蒸懈水定容1000ml,分装牛5ml灭菌，制成
3、底层较深的斜血）胰蛋白月东水溶液（蛋白月东2.5g,NaCL1.25g,蒸馆水250ml,PH调至7.6,分装灭菌）葡荀糖蛋白腺水溶液（100mlpH7.6的邓亨氏蛋白腺水屮加葡•萄糖lg,溶解后分装lml每管，灭菌）1.3仪器与器材超净工作台，天平、接种环，平皿，试管，灭菌锅、恒温培养箱、显微镜、离心机、细菌微量生化反应器、pH计、旋涡混合振荡器96孔板、灭菌试管、容量瓶、刻度吸管、接种环、移液器和吸头等生化发酵管（葡萄糖、麦芽糖、甘蛊醇、乳糖、尿素分解管、硫化氢、枸稼酸盐、赖氨酸、苯丙氨酸、鸟氨酸、半固体琼脂、蛋白豚水、木糖、葡萄糖磷酸盐、山梨醇等）1.4药物与试
4、剂琼脂，肉汤，麦康凯琼脂，95%酒精、甲基红、a蔡酚酒精、氢氧化钾、结品紫、草酸钱、碘化钾、碘片、复红、MH肉汤、MH琼脂M・R试剂（用95%酒精60ml溶解0.02g甲基红，定容100ml）V-P试剂（甲：5%a荼酚酒精溶液；乙：40%氢氧化钾水溶液，装于棕色瓶，4°C保存）草酸钱结晶紫染液（A液：结晶紫2g研细后加入95%酒精20ml使之溶解；B液：草酸钱lg溶于l（X）ml蒸镉水，两液混合）革兰氏碘液（2g碘化钾溶解于少量水中，加入lg碘片使之完全溶解，定容300ml）复红染液（2.5ml复红加100ml酒秸，取混合液10ml加80ml蒸憎水）2.大肠杆菌的分离
5、鉴定2.1大肠杆菌的分离培养无菌采集病、死鸡的川脏、心血等组织，划线接种于普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板及普通肉汤，37°C培养18〜24h,挑取可疑菌落接种在麦康凯琼脂平板/普通琼脂上，37°C培养18〜24h；再挑取粉红色单个菌落再接种在麦康凯琼脂平板/普通琼脂上分区划线，37°C培养18〜24h。连续纯培养3代，得到纯培养物。2.2细菌形态学观察挑取表面光滑，边缘整齐，灰白色半透明的单个小菌落划线接种丁•麦丿隶凯琼脂平板或伊红美兰琼脂平板，于37°C培养20h,观察结果。2.3革兰氏染色用接种环挑取一环牛理盐水放于玻片上，再挑少量纯培养物与玻片上牛理盐水混合，并均
6、匀涂布玻片上，口然干燥后滴加草酸钱结晶紫染液，l-3min后水洗；加革兰氏碘液媒染lmin,水洗；加95%酒精脱色15-30S,水洗;加分红复染lmin,水洗,自然干燥后镜检。观察细菌染色与形态特征。2.4生化试验挑取麦康凯琼脂上长出的红色菌落接种于牛化试验微量发酵管中，37°C培养24-48h,并记录试验结杲。2.4.1三糖铁琼脂（TST）接种用接种针挑取单个菌落，划线接种于培养管中（自下到上S型划线），再将接种针垂直插入半固体培养棊中央，穿刺到培养棊底部，然后沿原穿刺线退出接种针，37°C培养24h,换茬结果。2.4.2糖（甘、醇）类发酵试验挑取纯培养物接种于微量
7、发酵管屮，倒置37°C培养24-48h,观察结果。若能分解此种糖类产酸，指示剂显酸性变化，发酵管种颜色发牛变化，不分解此种糖类无颜色变化，产气可使倒置小管内产生气泡。2.4.3口引味试验挑取纯培养物接种于蛋口腺水培养棊，37°C培养3-5do先加少量乙醸，要懂事管以萃取和浓缩网喙使其浮于培养基表而，再沿关闭加入欧-波二氏试剂数滴，接触而橙红色的为阳性反应。2.4.4M-R试验挑取纯培养物接种于葡萄糖蛋白月东水培养基，37°C培养3-5d,加甲基红2滴立即观察结果，红色为阳性，黄为阴性。2.4.5V-P试验挑取纯培养物接种于葡萄糖蛋H豚水培养基，37°
