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《我馆生物组培室污染霉菌鉴定及抑菌实验》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、初中生科技创新成果竞赛项目一一研究论文我馆生物组培室污染霉菌鉴定及抑菌实验中报者：秦碧璇曾宝熠辅导教师：李振英毛峰辅导机构：北京市东高地青少年科技馆我馆生物组培室污染霉菌鉴定及抑菌实验摘要：本课题研究鉴定了我们科技活动所在的生物组培室2009年5月初至11月中旬组培实验中出现的污染霉菌，共分离到23个霉菌菌株，夏冬两季是霉菌污染高发期，分离的菌株占总数的82.6%,这些霉菌隶属于接合菌门和半知菌门,接合菌门有根霉屈，半知菌门有枝抱屈、青霉屈、镰刀菌屈、木霉属、交链抱屈、脉砲属、葡萄抱属、曲霉属和暗色抱科。同时，我们用灭菌处理的保加利亚乳杆菌发酵液做了以上霉菌的抑制实验，发现发酵处理液对
2、青霉属和葡萄也属有一定的抑制作用。关键词：霉菌；保加利亚乳杆菌；抑制选题背景我们是生物爱好者，经常和培养基打交道。但是，不可避免的，总有一些污染会出现在培养基上，把我们的实验搞得一团糟，还得重新做。我们对这些污染很感兴趣，于是就上百度搜了搜，得知，这些大多是霉菌，那它们是什么霉菌呢？口前述没有人做过调查研究，所以我们决定开展这个课题，认识这些霉菌并想办法抑制它们。我们生物兴趣小组另外两个同学正在做保加利亚乳杆菌发酵液对大肠杆菌的抑制实验，用微生物发酵液防治微生物是很好的防治方法，很环保，于是我们也尝试用灭菌处理的保加利亚乳杆菌发酵液做霉菌的抑制实验。研究过程一、查阅资料1、菌种鉴定特征
3、25°C培养7天菌落特征，包括形态、大小、色泽、透明度、致密度和边缘等;特化菌丝结构；孑包子形状颜色大小等。2、常见霉菌青霉、曲霉、毛霉、根霉、木霉、链霉菌、犁头霉等，查阅它们的特征，搜集菌落及显微特征图片。3、三点接种法用接种针从试管斜而上挑取极少量霉菌抱子点接于PDA培养皿上三点，即在等边三角形的三个顶点上接种，经培养后同一菌种可形成三个重复的单菌落。4、插片法将已灭菌的盖玻片斜插入PDA培养基培养皿上，一半露在外面，然后沿盖玻片与培养基交界处点接霉菌陀子。5、乳酸石碳酸制片清洗载玻片和盖玻片，在干净的载玻片上加一滴乳酸石碳酸，用接种针从菌落边缘处挑取少量带有砲子的菌丝，放在载玻片
4、上的染液中，用解剖针小心地把菌丝分散开，然后用盖玻片盖上，注意不能产生气泡。插片法获得的长有菌丝和砲子的盖玻片，将有菌丝的一面轻轻盖在滴加乳酸石碳酸的载玻片上，轻轻擦拭盖玻片上表而，即可显微镜下观察。6、改良牛津杯法将PDA培养基15ml倒入直径9cm的培养皿中，待培养基凝固后，吸取lOOul霉菌鞄了悬浮液，均匀地涂布于培养基上,待干后，在培养皿中央打直径为1・5cm的孔，用少许PDA填充孔底，凝固后，往孔屮加入经高压蒸汽灭菌处理的保加利亚乳杆菌发酵液200ul,加200U1MRS液体培养基做对照。每个处理做3次重复。7、血球计数板计数血球计数板1个大方格有25个中方格，16个小方格，
5、选取大方格4个角和中央的1个中格计数，根据公式“lml菌液中总菌数=每个中方格的总菌数x25xl04”，计算出配制IO?浓度的霉菌砲子悬液每个屮方格约有40个砲子。8、PDA培养基马铃薯去皮，用天平称ill200g,加1000ml水加热；煮沸20分钟后，用纱布滤净马铃薯碎屑，放入20g琼脂加热；琼脂溶解后，加入20g葡萄糖，补足1000ml水；葡萄糖溶解后，取若干分装试管，每管8mh其余培养基分装在2个三角瓶屮，121°C高压蒸汽灭菌25分钟；将试管倾斜摆放，制作试管斜面。9、酸化MRS液体培养基葡萄糖2g,牛肉膏蛋口豚lg,牛肉膏lg,干酵母0.5g,柠檬酸氢二鞍0.2g,磷酸氢二钾
6、0.2g,乙酸钠0・5g,硫酸镁0.058g,硫酸猛0・025g,蒸憾水100ml,各成分加热溶解后每管10ml分装。10、无菌水:100ml蒸憎水装入三角瓶中,121°C高压蒸汽灭菌25分钟，备用。11、乳酸石碳酸：苯酚结晶(加热熔化)20ml,乳酸20ml,廿油40ml,蒸憾水20ml分离、保藏菌种收集2009年5月初至11月屮旬我馆生物组培实验室屮的污染微生物，肉眼区分形态颜色上不同的菌，用接种针挑取少许菌丝接种在PDA培养JIIL±,25°C培养7天后，选取形态颜色比较均一的菌落，挑取少许转接到PDA试管斜面上,以上操作均在无菌条件下，培养7天后，冰箱内4°C保藏。三、分类特征
7、观察1、用三点接种法接种PDA培养皿，25°C培养7天，观察记录菌落特征，拍照。2、插片法培养霉菌，25°C培养7天。按乳酸石碳酸制片法显微观察菌丝及他了特征，拍照。3、菌种鉴定：根据网上资料及参考书籍，初步判断菌种种类，最后请专家鉴定。四.灭菌处理的保加利亚乳杆菌发酵液抑菌实验1、霉菌也子悬液制备用接种针从保存的菌株小挑取少许，在管口轻轻振动，去掉没粘牢的抱子，然后在PDA试管斜面上用针头轻轻点一下。接种好的试管28°C培养7天后，用无菌水冲
