抗球蛋白试验

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1、抗球蛋白试验直接抗球蛋白试验原理检测红细胞在体内是否被不完全抗体和（或）补体致敏的一种方法。不完全抗体在体内与相应红细胞抗原结合，红细胞不出现肉眼可见的凝集，当加入抗人球蛋白试剂后，则出现凝集反应。应用胎母血型不合新生儿溶血病免疫性溶血性输血反应自身免疫性溶血性贫血以及药物诱导产生的溶血性贫血。标本、试剂与器材标本EDTA抗凝血标本试剂阳性对照、阴性对照、多特异性抗球蛋白试剂(抗IgG+抗C3)、抗-IgG、抗-C3、IgG致敏5%红细胞悬液、生理盐水器材试管、试管架、移液管、台式离心机操作步骤待检标本5%红细胞悬液配

2、制：取2滴待检抗凝全血标本，用生理盐水洗涤3~4次，末次洗涤后，将上清液全部倒出，尽量吸干，用生理盐水配成5%的红细胞悬液。标记3支试管，分别为阳性对照、阴性对照和待检，在标记好的试管中分别加入1滴阳性对照5%红细胞悬液、阴性对照5%红细胞悬液、待检标本5%红细胞悬液，3支试管各加1滴多特异性抗球蛋白试剂，混匀。1000rpm离心1min，肉眼和显微镜下观察凝集，记录反应结果。加1滴IgG致敏5%红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000rpm离心1min，肉眼观察凝集，记录反应结果。结果判断阳性对照管凝集，阴性对照管不

3、凝集，待检红细胞凝集者为阳性，不凝集者为阴性。如果阴性对照和待检管都出现阳性反应，表示红细胞有自身凝集，在检测前应解决红细胞自身凝集问题。在第5步骤，加入IgG致敏的红细胞，应该出现凝集，如果仍未凝集表示阴性结果无效，试验应重做。注意事项标本采集后立即进行试验，试验延迟或中途停止可使抗体从细胞中释放出来。抗球蛋白试剂应按说明书使用最适稀释度，否则可能产生前带和后带反应而导致假阴性结果。待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白，以防止假阴性结果。离心时间和离心力要按标准操作。如果了解在体内致敏红

4、细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗IgG、抗IgM或抗C3单价抗球蛋白试剂进行试验。红细胞上若吸附抗体较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可呈假阴性反应。全凝集、冷凝集血液标本或脐血标本含有Wharton胶，试验前应充分洗涤。间接抗球蛋白试验【实验原理】红细胞在体外与血清（浆）孵育，如果血清中含有相应特异性不完全抗体，不完全抗体的Fab段与红细胞相应抗原特异性结合，但不出现肉眼可见的凝集反应，充分洗涤后，去除血清中未结合的游离抗体后，加入抗人球蛋白试剂，抗人球蛋白抗体Fab段和红细胞膜上不完全抗体的Fc段结合，以

5、此抗人球蛋白搭桥，形成肉眼可见的凝集反应。应用血清中不完全抗体检测和鉴定抗体效价测定交叉配血血型鉴定等。标本、试剂与器材1、标本待检血清（血浆）2、试剂多特异性抗人球蛋白试剂(抗IgG、抗C3)、IgG致敏5%红细胞悬液、5%O型红细胞悬液、阳性对照、阴性对照、生理盐水3、器材试管、试管架、移液管、台式离心机、37℃水浴箱操作步骤标记3支试管，分别为阳性对照、阴性对照和待检，在标记好的试管中分别加入2滴阳性对照血清、阴性对照血清和待检血清。在3支试管中各加1滴5%O型红细胞悬液。37℃孵育30-60min。用生理盐水洗

6、涤红细胞3-4次，末次洗涤后，彻底去除上清液。在3支试管里各加2滴多特异性抗人球蛋白试剂，混匀。1000rpm离心1min，轻轻摇动试管，观察凝集。在阳性对照凝集，阴性对照无凝集时，判断待检血清结果，出现凝集为阳性，未凝集为阴性，在无凝集的试管里加IgG致敏5%红细胞悬液，1000rpm离心1min，观察凝集，如仍不出现凝集，则表明第4步骤洗涤不彻底，抗球蛋白试剂与未洗净的游离抗体结合，或者是抗球蛋白试剂失效。如出现凝集，则表明阴性结果是可靠的。结果判断阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，待检红细胞凝集者为阳性，不凝集者

7、为阴性。注意事项孵育时间和温度：孵育是抗体致敏阶段，孵育时间和温度是影响凝集的第一阶段。一般情况下，有临床意义的抗体反应适宜温度是30-37℃，对于生理盐水介质，大部分抗体的检测要求的孵育时间是至少30min。洗涤充分：充分洗涤红细胞，否则抗球蛋白试剂优先和未洗净的球蛋白结合，出现假阴性。离心力和离心时间：离心力和离心时间要按标准操作。抗原抗体的比例：抗原抗体的比例会影响反应结果，如果增加红细胞数量，则减少每个红细胞结合抗体的量，可能引起假阴性，一般比例是2滴抗体血清加1滴2%-5%红细胞悬液，增加抗体比例有助于弱反应

8、抗体的检出。混有右旋糖的标本或采集在硅胶管中的标本可能引起DAT阳性。