第三节优良品种的培育和繁殖

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1、优良品种的培育和繁殖练习题班级姓名学号1．如图是含某目的基因的DNA片段，据图回答下列问题：(已知EcoRⅠ识别的序列为GAATTC，切割位点为G与A之间；SmaⅠ识别的序列为CCCGGG，切割位点为G与C之间。)(1)根据图示可知，若用EcoRⅠ和SmaⅠ限制酶切割，因此DNA片段可有__________个限制酶切割位点，切割后共有________种________个切割末端。(2)EcoRⅠ限制酶切割后形成的末端是________末端，在图中用笔标出切割部位。(3)如果EcoRⅠ限制酶切割形成的目的基因片段

2、要导入受体细胞，一般需要________作载体。其应具备的特点有：________________________________、____________________、__________________。(4)E·coliDNA连接酶连接目的基因和载体时连接的是图中________(填字母)部位的化学键。2．斑马鱼的酶D由17号染色体上的D基因编码。具体纯合突变基因（dd）的斑马鱼胚胎会发出红色荧光。利用转基因技术将绿色荧光蛋白（G）基因整合到斑马鱼17号染色体上，带有G基因的胚胎能够发出绿色荧光。未整

3、合G基因的染色体的对应位点表示为g。用个体M和N进行如下杂交实验（1）在上述转基因实验中，将G基因与质粒重组，需要的两类酶是和。将重组质粒显微注射到斑马鱼中,整合到染色体上的G基因后，使胚胎发出绿色荧光。（2）根据上述杂交实验推测亲代M的基因型是（选填选项前的符号）a.DDGGb.DDGgc.DdGGd.Ddgg（3）杂交后，出现红·绿荧光（既有红色又有绿色荧光）胚胎的原因是亲代（填“M”或“N”）的初级精（卵）母细胞在减数分裂过程中，同源染色体的发生了交换，导致染色体上的基因重组。通过记录子代中红·绿荧光胚胎

4、数量与胚胎总数，可计算得到该亲本产生的重组配子占其全部配子的比例，算式为3．为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用法从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因。在上述引物设计时，分别在引物中加入上图所示酶的识别序列，这样可以用酶和酶处理两个基因后，得到端（填图中字母）相连的融合基因。（2）将上述融合基因插入上图所示Ti质粒的T-DNA中，构建并导入农杆菌中。将获得的农杆

5、菌接种在含的固体平板上培养得到单菌落，再利用液体培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液。（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是，进一步筛选后获得转基因油菜。（4）提取上述转基因油菜的mRNA，在酶的作用下获得cDNA，再依据融合基因的DNA片段设计引物进行扩增，通过对扩增结果进行检测，可判断融合基因是否完成。4.下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点，请回答下列问题：（1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前、后，分别含有　　　　、　　　　个游

6、离的磷酸基团。（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越　　　　。（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是_________________________________________________________________。（4）与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止　　　　。（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入　　　　酶，若两两相连，则连接产

7、物中有哪几种情况？___________________________。（6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了　　　　　　　　　　　　　　。（7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在　　　　　　　　　　　　　　　　的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。