微博网站信息分类模式研究

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1、分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告ChineseJournalofAnalyticalChemistryDOI：10.3724/SP.J.1096.2012.1050296孔板法用于高通量血管紧张素转化酶抑制剂体外检测骆琳'丁青芝】马海乐（江苏大学食品与生物工程学院I，江苏省农产品物理加工重点实验室2.镇江212013）摘要为在体外迅速检测血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）的抑制活性•选川96孔板•以咲喃内烯酰三肽（FAPGG）为模拟底物•通过检测血管紧张素转化（ACE）酶解FAPGG生成N-［3-（咲喃）内稀醇酰卜2-苯丙氨酸（FAP）和双

2、甘氨肽（GG）后340nm处吸光值的下降衡呈ACE的活性•采用加入ACEI丽后ACE的活性变化衡量ACEI的活性。考察了不同缓冲体系、C1一浓度、ACE卿活性（ACE酶浓度）、缓冲体系的pH值等対h述检测模型反应体系的影响，建立了高通试降血压肽活性体外检测方法，本方法最多可同时检测96个样品的ACE抑制活性，上机分析时间仅需10s。不同批次活性平行测定的相对标准偏差均小于0.001%,”=0.667>0.05.各测定结果无显著差异，重现件好，椿密度佼髙。采丿IJ本方法测定了商品血管紧张索转化酶抑制剂Captopril的IG。值为16.19nmol/L

3、,与文献报道的测定结果一致。关键词高通戢，血管紧张素转化酶抑制剂•活性检测1引言人体内的血管紧张素转化酶（ACE,EC3.4.15.1）催化血管紧张索I生成血管紧张索II,后者是强烈的血管收缩剂和肾上腺皮质类醛笛酮释放的激活剂⑴.血管紧张索转化酶抑制剂（ACEI）可以通过抑制血管紧张素II的生成•在人体内起到调20110520收稿；20110720接受Email:mahaile888@163.com血压的作用£刃。Bnu.ACEi活性检测主要包括体外检测和体内检测（动物降血压试验）。体外检测模型简单，快速、准确，重复性高，在初期的研究和工艺筛选过程中

4、，往往使用体外检测⑷。因此•选择一种快速高效、准确口J靠的体外检测方法是ACEI类药物研究过程中要首先解决的问题。V体外检测方法的检测原理：通过加入血管紧张素T的模拟底物•在一定条件下与ACE作用，产生具有特异吸收特性的物质。通过检测加入ACEI丽后这种物质吸收特性的差异，让算该物质对ACE的抑制率心。常用血管紧张素I的模拟底物有马尿酰组氨酰亮氨酸（HippurylLhistidylleucine,HHL）和咲喃丙烯酰三肽N-［3-（2-furyl）acryloyl］-L-phenylalanyl-glycyl-glycine.FAPGG）oACE可

5、酶解HHL生成马尿酸（Hippuricacid,HA）和二肽（Histidyl-L-leucine）o用于检测ACEI抑制效果的常用方法是利用紫外比色法检测添加ACEI前后HA生成量变化叽但需要先提取出马尿酸•操作繁琐•耗时，检测结杲误差难以控制。许多研究者对这一方法进行了改进•利用HPLC或高效毛细管电泳等方法定量检测马尿酸卩宀，无须提取步骤•提高了检测的准确性，灵敏度和巫现性也较好，但样品前处理及检测过程耗时，需消耗大量有机溶剂或缓冲溶液，检测成本校高。Holmquist等®建立了一种ACE活性检测方法•利用FAPGG作为ACE作川的底物，将其水

6、解成FAP（N-［3-（咬喃）丙稀醇酰］-2-苯丙氨酸）和GG（双tt氨肽）。这些肽类的释放会减少FAPGG在预期波长的吸光度。文献［6,7］的方法与之类似。Vermeirssen等同在该方法的基础上建立了ACEI活性检测方法。与文献［1］相比•省去了乙酸乙酯萃取步骤，操作简单•快速准确，适用于ACE抑制剂的大规模快速检测。Vermeirssen等冈利用此方法对几种商品ACE抑制剂进行实验,Actis-Goretta（,0］和Murray⑴］等对该方法进行了不同程度的改进。但是这些方法都是基于分光光度法•试剂用量大，检测周期长、检测成本较高。本研究采

7、用微量法直接测立ACEI活性，省去了苹取步骤，简化实验操作•用96孔板代替传统的比色皿•用酶标仪代替紫外分光光度计，试剂用量少，大幅提高了检测速度和精密度•建立了一种方便快捷、试剂用量少、经济实用的检测方法。2实验部分2.1仪器、试剂与材料PHS-3C精密pH计（上海精密科学仪器有限公司）；CARY100紫外扫描分光光度计（美国瓦里安公司）；MSS全波长酶标仪（美国热电公司）；AvantiTMJ-25高速冷冻离心机（美国BecKman仪器冇限公司）；SPX-250B生化培养箱（常州国华电器有限公司）。血管紧张索转化酶（ACE,EC3.4.15.1）,

8、参考了文献［12］的方法•自猪肺中提取；FAPGG,FAP,GG,HEPES（羟乙基哌嗪乙磺酸）,Capto