人叶酸（FA）酶联免疫分析

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1、人叶酸（FA）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：96Tlyg/L-40ug/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中叶酸（FA）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人叶酸（FA）水平。用纯化的人叶酸（FA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入叶酸（FA）,再与HRP标记的叶酸（FA）抗体结合，形成抗体■抗原■酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的叶酸（FA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度

2、（0D值），通过标准曲线计算样品中人叶酸（FA）浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlX1瓶7终止液6mlXl瓶2酶标试剂6mlX1瓶8标准需(80ug/L)0.5mlX1瓶3酶标包被板12孔X8条9标准殆稀释液1.5mlX1瓶4样品稀释液6mlX1瓶10说明书1份5显色剂A液6mlX1瓶11封板膜2张6显色剂B液6mlX1/瓶12密封袋1个标本要求1.标木采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标木放于・20°C保存，但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.

3、标准甜的稀释：木试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。40ug/L5号标准品150pl的原倍标准品加入150（11标准品稀释液20Ug/L4号标准品l50pl的5号标准品加入150

4、11标准品稀释液10ug/L3号标准品150

5、11的4号标准品加入15（）卩1标准品稀释液5ug/L2号标准品150

6、il的3号标准品加入150j.il标准品稀释液2.5ug/L1号标准品150^1的2号标准品加入150）11标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白刈照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酚标包被板上标准品准确加样50卩1,

7、待测样品孔屮先加样品稀释液40卩1,然后再加待测样品10卩1（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。1.温育：用封板膜封板后置37°C温育30分钟。2.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸饰水20倍稀释后备用3.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。4.加酶：每孔加入酶标试剂50gl,空白孔除外。5.温育:操作同3。6.洗涤：操作同5。7.显色：每孔先加入显色剂A50M，再加入显色剂B50pl,轻轻震荡混匀，37°C避光显色15分钟.8.终止：每孔加终止液50）11,终止反应（此时蓝

8、色立转黄色）。9.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：准备试剂，样品和标准品计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查岀相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算岀标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方对使用，酶标包被板开封后如耒用完，板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时对在

9、水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使川加样器，并经常校对其准确性，以避免试验谋差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使川排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本小待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请故后乘以总稀释倍数（XnX5）o5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英

10、文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8°Co2.有效期：6个刀