实验1大肠杆菌的培养和分离ppt课件

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1、实验1：大肠杆菌的培养和分离大肠杆菌（E.coli）分布：人和哺乳动物肠道，此外还广泛分布于水、污水、土壤、谷类、乳制品等当中。大肠杆菌在人体的_____中一般对人体无害，但任何大肠杆菌如果进入__________都会对人体产生危害。大肠杆菌是_______工程中被广泛采用的工具。肠道泌尿系统基因革兰氏______（填阴或阳）性菌阴代谢类型：异养，兼性厌氧型生长适宜温度：质粒、EcoRⅠ限制酶、E.coli-DNA连接酶、受体细胞37℃左右易培养、生活周期短等特点。细菌的代谢类型自养型细菌异养型细菌:光合自养型:化能自养型:大部分腐生菌和寄生菌如蓝细菌如

2、硝化细菌1、同化作用类型2、异化作用类型需氧型细菌厌氧型细菌兼性厌氧型细菌大多数细菌如破伤风杆菌如酵母菌、大肠杆菌。大肠杆菌属于异养、兼性厌氧型细菌大肠杆菌酵母菌放线菌霉菌菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量生长繁殖时，所形成的肉眼可见的具有一定形态结构的子细胞群体。不同微生物形成的菌落具有不同的特征，是鉴定菌种的重要依据。如菌落的大小、形状、边缘、光泽度、颜色、透明度等。菌落的概念白色或乳白色，光滑大肠杆菌菌落：二、培养基不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方3、调节pH1、培养基的种类2、成分水、碳源、氮源、无机盐、生长因子(生长因子即细菌生长必

3、需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)真菌：5～6细菌：6.5～7.54、有时会加一定量的氯化钠以维持一定的渗透压(固体、半固体、液体)1.无菌操作的概念无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止________污染的方法。三、无菌操作_________必须无菌、_________也必须要无菌、___________时不能带入其他杂菌主要包括：杂菌2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒：使用较温和理化因素，仅杀死物体表面或内部的一部分对人体有害的微生物的过程。不能杀死芽孢和孢子。灭菌：使用强烈的理化因素消灭物体内外所有微生物，包括芽

4、孢和孢子。各种器具培养基转移菌种高压蒸汽灭菌洒精灯灼烧灭菌干热灭菌灭菌方法：煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂消毒法（酒精、氯气等）紫外线消毒法消毒方法：3、常用的灭菌和消毒的方法培养基、无菌水、各种耐高温的玻璃金属器具需要保持干燥耐高温的玻璃金属器皿接种环等金属器具高压蒸汽灭菌锅1kg/cm2、121℃下维持15min.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。（一）制备LB培养基（通用的细菌培养基）1、配

5、方：蛋白胨0.5克，酵母提取物0.25克，氯化钠0.5克，水50ml（配固体培养基再加琼脂1克）溶解计算称量调pH分装加塞，包扎2、流程四、操作步骤灭菌倒平板①分装：注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，因此在将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用__________。②加塞：试管用塑料盖或________；三角瓶口用_______或_________封口,再用_________或报纸封口。③包扎：用________或报纸三角漏斗棉花塞封口膜6层纱布牛皮纸牛皮纸高压蒸气灭菌法④灭菌1）加水：2）装锅：向外层锅内加入适量的水，加水的要求是_________.物品

6、放置的要求______________________：加盖：将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的_______内。再以________方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。不触及内胆整齐、稳定、留出空隙排气槽两两对称3）加热排气：4）保温保压：5）出锅：打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的_______。_________________后，关上排气阀。当锅内压力升到_______kg/cm2时，控制热源，维持压力至______min。切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力降至____时，打开________，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品

7、。冷空气待冷空气完全排尽0115排气阀否则会因锅内压力较高，打开气阀后造成的压力差可能使容器内的培养基喷溅造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至使容器爆炸。灭菌后，通常将实验用具放入60℃~80℃_____中烘干，以除去灭菌时的水分，避免引起_____。烘箱污染倒平板：待培养基冷却至_____℃时，将每只培养皿倒入_________ml未凝固的固体培养基，置于_____位置上，轻轻晃动使其均匀铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。_______备用。制斜面：将未凝固的固体培养基的试管____放，冷却待凝使即成为斜面。６０10～12水平倒置斜⑤倒平板、制斜面操作平

8、台：灭菌好的培养基和实验器具置于超净台上打开_________和________