河北安国7种中药材AM真菌遗传多样性研究

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1、密级:分类号:学校代码:10075学号：20091038理学硕士学位论文河北安国7种中药材AM真菌遗传多样性研究学位申请人：王雅丽指导教师贺学礼教授学位类别理学硕士学科专业授予单位答辩日期植物学河北大学二O—二年六月CODE:10075NO:20091038ClassifiedIndex:U.D.C.:ADissertationfortheDegreeofM.ScienceAMfungalgeneticdiversityintherhizosphereofsevenmedicinalplantsinAnguoofHebeiProvinceC

2、andidate:WangYaliSupervisor:Prof.HeXueliAcademicDegreeAppliedfor:MasterofScienceSpecialty:BotanyUniversity:HebeiUniversityDateofOralExamination:June，2012河北大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得河北大学或其他教育机构的学位

3、或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。作者签名:日期引2年$月3日学位论文使用授权声明本人完全了解河北大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本学位论文属于1、保密口，在年月日解密后适用本授权声明。2、不保密sZ（请在以上相应方格内打“）保护知识产权声明本人为申请河北大学学位所提交的题目为（彳茫M桝牛Q材艸玉啬冕忆乡祥性硒况

4、的学位论文，是我个人在导师（象轨指导并与导师合作下取得的研究成果，研究工作及取得的研究成果是在河北大学所提供的研究经费及导师的研究经费资助下完成的。本人完全了解并严格遵守中华人民共和国为保护知识产权所制定的各项法律、行政法规以及河北大学的相关规定.本人声明如下：本论文的成果归河北大学所有，未经征得指导教师和河北大学的书面同意和授权，苯人保证不以任何形式公开和传播科研成果和科研工作内容。如果违反本声明，本人愿意承担相应法律责任。声明人:工雅两日期:勿年“月艮日日期：年夕月塔日日期：为门年夕月％日为探明药用植物根围AM真菌遗传多样性，于2010

5、年8月在河北省安国市3个样地（屮药材种植基地、霍庄、大户村）用随机抽样法采集7种屮药材根围土壤样品，分离筛选双网无梗囊霉（Acaulosporahireticulata）为试验菌种，进行孑包子DNA提取、PCR扩增、序列测定及聚类分析，研究了双网无梗囊霉遗传多样性与土壤因子、宿主植物之间的关系，并选取两条代表菌株所测序列，连同从NCBI数据库中下载的4属28种AM真菌和应序列构建系统发育树，并从土壤中提取AM真菌DNA,纯化，PCR扩增后进行变形梯度凝胶电泳（DGGE）分析。取得的主要试验结果如下：1.口然条件下，7种中约材植物根系均能与A

6、M真菌形成良好共生关系。双网无梗囊霉基因序列保持了高度稳定性，具冇广谱性。rDNAITS区测序及Bioedit序列分析表明，土壤条件和宿主植物对AM真菌DNA序列有一定影响，在真菌ITS区出现0〜8个碱基差异，但3个样地7种植物双网无梗囊霉DNA相似性在99.2%以上，基因序列保持了高度稳定性。说明双网无梗囊霉对样地和宿主植物没有严格依赖性和选择性，在样地和植物间基I大I序列保持了高度稳定性，其分布具有广谱性。2.AM真菌遗传多样性与土壤因子密切相关。同一样地不同中药材双网无梗囊霉DNA相似性系数和土壤因了相似性很高，不同样地同一屮药材AM

7、真菌DNA碱基序列相似系数低于前者，可见遗传多样性与土壤因子密切相关。3.聚类分析结杲显示，环境和土壤条件对双网无梗囊霉基因序列的影响大于宿主植物的影响。土壤因了比宿主植物对AM真菌群落影响更大。不同样地双网无梗囊霉DNA序列比较，大户村与霍庄相似性系数较高，AM真菌在分子水平上无显著差异，这两个样地先聚在一起，而种植基地与其他样地相似性系数较低，后聚在一起，样地间土壤因了比较，大户村与霍庄和似，与基地茅异大。进一步说明序列弟异受土壤因子影响大于宿主植物。可能是由于试验样地为农山土，采用人工施肥，同一样地土壤因了基木相同，且植物为1年生，故

8、双网无梗囊霉DNA碱基斧异受宿主植物影响不明显。4本试验建立了检测土壤AM真菌祥落的PCR-DGGE休系。研究结果表明，巢式PCR反应的第一轮反应体系中土壤DNA模板量约2-5n