微生物的培养(二)

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1、实验三微生物的培养(二)、细菌对抗菌药物的敏感试验医学微生物学实验实验内容：1.微生物的培养(二)－－－非常规细菌的培养：（1）专性厌氧菌的培养（2）细菌-L型的培养2.细菌对抗菌药物的敏感试验3.皮肤、咽部细菌的培养1.微生物的培养(二)*非常规细菌的培养：专性厌氧菌的培养细菌-L型的培养（1）专性厌氧菌的培养生物学方法：如疱肉培养基(培养基中的肉渣含有不饱和脂肪酸及谷胱甘肽，能吸收培养基中的氧气，降低其氧化还原电势)。物理学方法：如厌氧缸法(用抽气换气法抽出缸内的空气，充入氮气或者二氧化碳，使缸内造成厌氧环境)。化学方法：焦

2、性没食子酸法:焦性没食子酸加碱性溶液能迅速而大量的吸收氧，生成深棕色的焦性没食子橙，是有效的化学除氧方法厌氧袋法：如冷触媒法：利用气体发生器产生氢及二氧化碳，产生的氢在触媒作用下，与罐内的氧结合成水，将氧消耗掉，造成无氧环境。产生的二氧化碳约为10％，也适宜厌氧菌生长。方法为：先将触媒(金属钯或铂)及美蓝指示剂放入罐内，然后将已接种的平板置于罐内，将气体发生袋的指定角剪开，加入lOml水，立即放入罐内，封闭厌氧罐即可。示教：厌氧袋、厌氧罐，焦性没食子酸法，庖肉培养基（2）细菌L型的培养细菌L型生长缓慢，营养要求高，对渗透压敏感，普

3、通营养基上不能生长，培养时必须用高渗的含血清的培养基。菌落多呈油煎蛋状。示教：L－型菌落2.细菌对抗菌药物的敏感试验细菌对抗菌药物的敏感试验（简称：药敏）是体外测定细菌对临床抗菌药物的敏感性的试验，细菌对抗菌药物的敏感试验不属于病因诊断范畴，但在分离出病原菌和鉴定后，对指导临床选择用药、及时治疗和控制耐药菌感染有重要意义。不同的菌种或菌株，对同一药物的敏感性不同；同一菌种或菌株，对不同的药物的敏感性亦不同。药敏试验中所用的专用名词（1）敏感（sensitive）：指被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的某种抗菌药物治愈。（2）中度敏

4、感（moderatesensitive）：指通过提高某种抗菌药物的剂量或在该药物浓集的部位，细菌生长可被抑制，感染被治愈。（3）中介度（intermediate）：这一范围是“缓冲域”，是由操作上的误差造成的，不作为报告形式。如确需明确该药的敏感度，需重复试验或做稀释法敏感试验。（4）耐药(resistance)：指被测菌株所引起的感染不能用该抗菌药物治愈。（5）最低抑菌浓度(minimalinhibitoryconcentration)：抗菌药物能够抑制细菌生长所需要的最低浓度。单位：μg/ml或U/ml。（6）最低杀菌浓度(m

5、inimalbacteriacidleconcentration)：抗菌药物杀灭细菌所需要的最低浓度。单位：μg/ml或U/ml。在临床细菌实验室中，最常用的药敏试验方法是琼脂扩散法，适用于需氧及兼性厌氧菌。对厌氧菌或其他个别菌株的药敏试验，可以采用试管稀释法。常用药敏试验纸片判断标准与相应的MIC近似值抗菌药物纸片含药量抑菌圈直径(mm)相应的MIC(μg/ml)耐药中介度中度敏感敏感耐药敏感青霉素10U≤28——≥29≥0.2≤0.1链霉素10μg≤1112～14—≥15≥15≤6氯霉素30μg≤1213～17—≥18≥25≤

6、12.5庆大霉素10μg≤1213～14—≥15≥8≤4红霉素15μg≤1314～17—≥18≥8≤2四环素30μg≤1415～18—≥19≥16≤4磺胺药1.25/23.75μg≤1011～15—≥16≥8/152≤2/38注：MIC为一种药物的最低抑菌浓度(minimalinhibitoryconcentration)琼脂扩散法①将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌分别接种于琼脂平板上（密集划线法）。②用蜡笔在平皿底面将其分为4个区域，分别标记抗生素的名称。③用灭菌后的镊子夹取各种抗生素滤纸片，平放至培养基表面的相应位置。④置37℃培养

7、24h，测量滤纸片周围的抑菌圈的直径。抑菌圈3.空气、皮肤、咽部细菌的培养自然界分布着大量细菌，寄生于人体的正常菌群繁多，在正常情况下不致病。通过本实验认识细菌在皮肤和咽部的分布，并对咽部细菌进行进一步的鉴定。皮肤细菌的检查：①取普通琼脂平板一个，用蜡笔在平板背面分成两半，标明A和B两个区。②先将手指在A区按一下，然后再将手指用2％的碘酒和75％乙醇消毒后涂抹B区。③将琼脂平板置37℃培养24h，观察结果咽部细菌的检查：①用无菌棉拭子蘸取咽部分泌物，涂在血平板一端，用接种划线分离。②将血平板置37℃培养24h。观察溶血现象并挑取不

8、同菌落作革兰染色，镜检。实验材料：1.大肠杆菌和金黄色葡萄球菌斜面各1管/小组。2.琼脂平板3个/小组，血平板2个/小组。3.抗生素小瓶1套/小组。4.无菌棉拭子2个/小组。实验报告内容：1.细菌对抗菌药物的敏感试验（本次实验）2.皮肤、咽部细菌的