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《专题介绍-中国细胞生物学学报（原名细胞生物学杂》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、中国细胞生物学学报ChineseJournalofCellBiology2011,33(9):964–968http://www.cjcb.org专题介绍小鼠动物实验方法系列专题(六)小鼠是生命科学研究和医学研究的重要模式生物。随着小鼠基因组测序计划的完成,国际上明显加速了在这方面研究的投入和部署。从2005年起,美国、欧盟、加拿大等批准了一系列重大科学计划,开展基因工程小鼠的大规模研制,这些项目包括美国国立卫生院的小鼠基因剔除计划(KOMP,http://www.nih.gov/sci-ence/models/mouse/knoc
2、kout)、欧盟第七框架的欧洲小鼠条件性剔除计划(EuCOMM,http://www.eucomm.org)和加拿大的北美小鼠条件性剔除计划(NorCOMM,http://norcomm.phenogenomics.ca/index.htm)等。中国也在2006年由科技部立项、上海南方模式生物研究中心牵头启动了中国的小鼠条件性基因敲除计划,该计划支持了国内几十个高校和研究所150种条件性基因敲除小鼠模型的建立。随着这些研究计划的快速进展,大量基因工程小鼠模型成为科学界的共同资源,这将对功能基因组和人类疾病治疗的机制以及新药的研发产生
3、重大而深远的影响。为帮助读者能更好地利用这些小鼠资源开展研究,我们以专栏形式陆续刊登介绍小鼠动物实验技术的文章,也欢迎读者能够踊跃投稿,把自己手头正在做的小鼠动物实验技术方法和心得体会介绍给大家,一起来分享实验过程中的得失和快乐。卵清蛋白诱导129Sv小鼠建立哮喘模型的方法林志荣1 王维刚1 严惠敏2 吴友兵2 任建科2*12(同济大学生命科学与技术学院,上海200092;上海南方模式生物研究中心,上海201210)摘要近年来,哮喘发病率有逐年增长的趋势,因此利用动物模型研究哮喘发生的分子生物学机制及治疗方案具有重要的意义。利用卵清
4、蛋白(ovalbumin,OVA)致敏诱导动物发生哮喘是比较成熟的方法。常用的实验动物有小鼠、大鼠、豚鼠、家兔等。该文主要介绍一种可以有效致敏129Sv品系小鼠、建立哮喘疾病模型的技术路线,并对模型指标进行了具体的描述,供从事相关研究的人员参考。关键词哮喘;卵清蛋白;雾化吸入;129Sv哮喘属于Ⅰ型超敏反应,也称为速发型超敏反在哮喘的发病机制中,Thl和Th2淋巴细胞亚群应,是由多种炎性细胞如嗜酸性粒细胞、肥大细数目功能失衡,以及Thl/Th2比例失调起到了重要[1-2][7]胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等作用。Th2分
5、泌的细胞因子(IL-4、IL-5、IL-10、[3-4]和Th2细胞因子(IL-4、IL-5、IL-10、IL-13)参与IL-13)对哮喘具有促进作用,Th1分泌的细胞因子[5,8-13]的气道慢性炎症疾病。引起哮喘的抗原也称变应(IFN-γ、IL-12)对哮喘的发生有抑制作用。原。已确认的变应原有相似的物理特性,如易溶于迄今,研究人员对于动物哮喘模型建立及运用[14]水、分子量在10~40kDa之间,但它们的生物学性质已有100多年,其中运用腹腔注射卵清蛋白(oval-不同,主要包括植物花粉、真菌孢子、菌丝和螨虫bumin,OV
6、A)预致敏,随后进行喷雾吸入OVA,已成[15]等。哮喘作为一种慢性气道炎症,反复发作使气道为建立小鼠哮喘模型应用最为广泛的方法。本文壁结构发生变化,包括气道平滑肌增厚、细胞外基质沉积、基底膜增厚、炎症细胞浸润和腺体增生肥收稿日期:2011-05-16接受日期:2011-07-05国家863计划(No.2008AA02Z126)和上海市科委(No.10140901400)大,导致持续非特异性的支气管高反应性(bronchial资助项目[5-6]hyperresponsiveness,BHR)。*通讯作者。Tel:021-507936
7、48-82022,E-mail:renjk98@163.com林志荣等:卵清蛋白诱导129Sv小鼠建立哮喘模型的方法965就这一方法的实施及相关评价指标做一详细介绍。转移到新的离心管中,置于–20ºC保存用于分析细胞因子水平;沉淀用PBS悬浮后用于细胞计数和涂1材料与方法片观察(瑞氏—姬姆萨染色,Wright-Giemsastaining),1.1试剂和仪器根据染色后细胞的形态、大小以及核的形态区分成OVA(Sigma公司),用生理盐水配制成1%的溶嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞。液;生理盐水(丰原涂山制药有限公司);
8、氢氧化铝佐体积从小到大是:淋巴细胞、中性粒细胞、巨噬细剂(国药);戊巴比妥钠(Sigma公司);980超声雾化仪胞和嗜酸细胞。嗜酸性粒细胞颗粒呈鲜红至桔红色;器(上海新天缘医疗设备有限公司);荧光定量PCR仪巨噬细胞核呈浅紫色,胞质呈
