GBT19684-2005 饲料中金霉素的测定 高效液相色谱法 - 下载地址.pdf

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1、ICS65.120一一B46翰羚中华人民共和国国家标准GB/T19684-2005二en.r.U--1__/L是燕昌．t占‘、r，，lrim-!-．‘乙*20卜}I．，.LW*.4&、J．词料甲盆矍索的;!L,正局双准TO色IIIitDeterminationofchlortetracyclineinfeeds-Highperformanceliquidchromatography2005-03-23发布2005-06-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局．，.www.bzxzk.com.小油、菌豢辈秘埔瞥撞筐豁荟发布GB/T19684-2005．JJ舀日月U胃本标准是在参阅

2、了美国公职分析化学家协会（AOAC）方法及国内外大量文献的基础上，根据我国技术发展水平研究制定的。考虑微生物法和浊度分析法操作时间长，分析难度大，因此采用了高效液相色谱法（HPLC)。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准负责起草单位：农业部饲料工业中心。本标准参加起草单位：国家饲料工程技术研究中心、国家饲料质量监督检验中心（北京）。本标准起草人：张丽英、李德发、杨文军、王燕华、常碧影、李兰。.www.bzxzk.com.GB/T19684-2005饲料中金霉素的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了以高效液相色谱（HPLC)测定饲料中金霉素的

3、方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中金霉素的测定，检测限为1ng，最低检出浓度为4mg/kg.2规范性引用文件下列文件中的条款通过在本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样3方法原理使用盐酸一丙酮溶液提取饲料中的金霉素，调至pHl.0^-1.2，振荡，过滤，注人反相柱分离，紫外检测器检测，外标法定量分析。4试

4、荆和材料本标准所用试剂，除特别注明外，均为分析纯。水为蒸馏水，色谱用水为去离子水，符合GB/T6682用水的规定。4.1氢氧化钠溶液：400g/L.4.2乙二酸（草酸）溶液：[c(1/2HZC20,)=0.01mol/L].4.3盐酸溶液：[c(HCI)=4mol/L].4.4提取液：丙酮十盐酸溶液（4.3)＋水＝13十1+6.4.5流动相：乙二酸溶液（4.2)＋乙睛（色谱纯）＋甲醇（色谱纯）=10十3+2.4.6金霉素标准液：4.6.1金霉素标准储备液准确称取金霉素标准品0.01290g（含量大于96.9%，储存于硅胶干燥器中），精确至0.1mg，置于50mL容量瓶中，用提取液（4.

5、4)溶解并定容至刻度，摇匀，其浓度为250g/L,贮于4*C～6℃冰箱中，有效期为一周。4.6.2金霉素标准工作液准确移取4mI一金霉素标准储备液（(4.6.1)于10mL容量瓶中，用超纯水稀释至刻度，摇匀，其浓度为100g/L，现用现配。5仪器、设备5.1离心机：3000r/mine5.2pH计：精度0.01mV.5.3恒温振荡器：300r/min.5.4微孔滤膜（孔径0.45pm).5.5分析天平：感量0.1mgo5.6分析天平：感量0.01mg..www.bzxzk.com.GB/T19684-20055.7高效液相色谱仪。6试样的选取和制备按GB/T14699.1选取有代表性样

6、品200g-500g，用四分法缩至100g，粉碎通过0.45mm孔径筛，充分混匀，贮于磨口瓶中备用。7分析步骤7.1称取试样lg-10g（金霉素含量大于等于40mg/kg)，准确至0.1mg，置于具塞锥形瓶中，加人100mL提取液（4.4)，手摇2min，再用盐酸溶液（4.3)调pH至1.0^-1.2(记录盐酸溶液的消耗量，作为稀释倍数），盖紧塞子，置恒温震荡器（5.3)中（振荡速度110r/min)振荡30mine7.2将提取液（7.1）倒人离心管，3000r/min离心15min,7.3取离心上清液用滤膜（5.4)过滤，滤液作为试样溶液。7.4HPLC测定参数的设定：分析柱C18：

7、柱长150mm，内径4.6mm，粒度5tm（或类似分析柱）；柱温：室温；检测器：紫外检测器，检测波长375nm;流动相速度：1.0mL/min;进样量：10l1.^-20tA_7.5定量测定：采用多点外标法，根据浓度与峰面积的线性回归方程计算金霉素的含量（g/L)o8测定结果的计算8.1每千克试样中所含金霉素的质量X(mg）按式（1)计算：X＝竺Xn······“··．．·．．·．．·．．·．．·．⋯⋯（1）刀i式中：X—每千克试样中所含金霉素