蟑螂抗药性实验_任东升

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1、蟑螂的抗药性实验任东升中国疾病预防控制中心传染病预防控制所E-mail：rendongsheng@sohu.com2009年12月3日提纲°蟑螂抗药性的测定方法¾药膜法¾点滴法°蟑螂点滴法抗药性测定中的实验要点°生物测定的基本原则°灭蟑饵剂的药效评价方法探讨蟑螂生测方法°针对触杀性灭蟑杀虫剂的生物测定方法：¾WHO推荐的药膜法¾国内使用较多的还有点滴法蟑螂抗药性监测方案°2008年4月22日，媒介生物学及控制分会蟑螂学组组织相关专家讨论草拟了《蟑螂抗药性监测方案》，方案包含了蟑螂抗性监测的药膜法和点滴法。WHO

2、蟑螂抗药性测定：药膜法°这个方法是测量蟑螂种群对给定一种杀虫剂的敏感性水平。这个技术设计用来检测一个杀虫剂抗性品系是否出现，什么时候出现。°药膜法优缺点：¾优点：简便、实用；¾缺点：不如点滴法的结果精确。建立基线°把一批蟑螂放在用标准杀虫剂制作的广口药膜瓶中，观察击倒率。通过这个试验结果，我们能够得到击倒50％和95％所需的时间，即LT50和LT95。每次试验要做5个重复，每个重复约10只试虫。°这个试验应该在不同的地点、不同的季节多次进行。实验条件°试虫：试验最好用蟑螂雄成虫。如果不能得到足够多的雄性，也可以

3、通过雌虫和若虫的试验来得到敏感性的信息。°试验条件：试验应该在没有被杀虫剂污染的房间里进行。蟑螂试验的房间温度20℃到30℃之间，相对湿度保持在25％以上。试剂盒的组成：¾50ml用丙酮溶解的0.5%狄氏剂、1.0%马拉硫磷、0.5%二嗪农、0.1%残杀威的母液。¾4瓶丙酮溶液，每瓶50ml¾4个10ml的量筒¾3个5ml刻度吸量管¾6个玻璃广口瓶，容量大约500ml¾1瓶凡士林¾1瓶石蜡油¾一套说明说明书，一套报表，6张对数机率格纸测绘回归线操作程序1.蟑螂应该尽可能的从一个地方收集，饲养在一个容器中直到被使

4、用。2.加1ml的母液到9ml的丙酮溶液中稀释。每个广口瓶中放入2.5ml的稀释液。水平转动这个广口瓶，让稀释液均匀的覆盖在广口瓶壁和底部，直到丙酮完全挥发。一般来说，下午处理瓶子，第二天早晨使用比较方便。3.在瓶口内侧均匀涂抹凡士林和石蜡油等比例混合物，防止蟑螂逃逸。这种矿物油的混合物加热的时候更容易混合。4.每个广口瓶中放10个蟑螂，按照记录表中的要求每隔一定时间记录击倒时间。在每一个观察试验中，直到记录90－100％的蟑螂被击倒。如果24小时后仍有存活，放一片马铃薯作为食物。蟑螂返回正常姿势不能爬行被认为

5、是击倒。实验数据的处理°先在实验室的敏感种群进行上述试验，结果记录在附件表中。°蟑螂对有机氯的抗性LT50多超过72小时。°如果用氨基甲酸酯类杀虫剂，试验应该持续5天，因为氨基甲酸酯类杀虫剂的抗性表现为蟑螂可能被击倒，但几天之后会恢复，因此在这种试验中记录恢复的蟑螂数量，计算LT50的时候，最初的击倒数目应当减去恢复的数目。实验数据的处理：对数-概率纸°实验者通过选定的浓度的四个重复试验，可以得到时间－击倒的回归线。°试验结果应该在提供的对数－概率纸上画点作图。回归曲线通过眼睛观察作图，通过图表读取LT50和L

6、T95。°这条回归线的LT50不应当超过最高的击倒数。药膜法浓度的确定°药膜法在使用过程中如何确定使用药膜的浓度？¾WHO诊断试剂盒中推荐浓度：0.05%狄氏剂、0.1%马拉硫磷、0.05%二嗪农、0.01%残杀威；¾一般情况下，丙酮为溶剂将各种杀虫原液配制成0.05%稀释液即可；¾根据实际情况，按照杀虫剂推荐使用的浓度做药膜的浓度。蟑螂抗药性测定：点滴法°点滴法是基本的生物测定方法之一。°点滴法的优缺点：¾优点：精确，可以得到定量的数据；¾缺点：工作量比药膜法大，要得到一个合适的数据可能需要反复多次实验。°以

7、蟑螂生测简要说明点滴法的操作程序。蟑螂点滴法生物测定°生物测定的程序：¾准备饲养条件：烧杯、饲料、水、封口纱布；¾准备试虫：按照实验数量要求捕捉足够数量的试虫；¾杀虫剂系列浓度的配制：按照实验要求系列配制杀虫剂溶液；¾试虫麻醉和点滴处理；¾记录实验结果：24小时后记录实验结果；¾数据处理：求LD50，单位ug/头。如何确定杀虫剂浓度范围°可以根据文献资料和杀虫剂的性质估计杀虫剂LD50的区间范围；°采用10倍系列稀释的方法，得到试虫全死和全活的区间。高效氯氰菊酯预实验结果：试虫为蟑螂雄成虫,点滴器为1.04uL

8、浓度（ug/mL）00.1110100100010000总虫数109111010109死虫数000510109如何确定杀虫剂浓度范围编号CK12345浓度ug/mL010033113.71.2结果预期：¾最好死亡率在10%~90%之间有5个浓度；¾最少死亡率在10%~90%之间有3个浓度；¾死亡率高于和低于50%都有浓度。不能满足上述条件，需要调整浓度范围重新测试。正常情况做2~3次可