ATP检测试剂盒

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1、ATP检测试剂盒产品编号产品名称包装S0026ATP检测试剂盒(ATPAssayKit)>200次产品简介：ATP检测试剂盒(ATPAssayKit)可以用于检测普通溶液中或细胞或组织内的ATP(adenosine5’-triphosphate)水平。ATP，作为最重要的能量分子在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。ATP水平的改变，会影响许多细胞的功能。通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下，ATP水平会下降，而高葡萄糖刺激等对于一些细胞可以上调细胞内ATP水平。通常ATP水平的下降表明线粒

2、体的功能受损或下降，在细胞凋亡时ATP水平的下降通常和线粒体的膜电位下降同时发生。本试剂盒根据萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)化荧光素产生荧光时需要ATP提供能量研制而成。当萤火虫荧光素酶和荧光素都过量时，在一定的浓度范围内荧光的产生和ATP的浓度成正比。这样就可以高灵敏地检测溶液中的ATP浓度。本检测试剂盒可以检测浓度低达0.1nmol/L的ATP。而常规的细胞或组织裂解液中ATP的浓度仅为0.1-1μmol/L，一些常见细胞的细胞内ATP水平约为10nmol/mg蛋白。检测

3、细胞或组织内ATP浓度时，用本试剂盒提供的裂解液裂解后即可以测定ATP浓度。本试剂盒方便快捷，通常10-20个样品可以在30-60分钟内测定完毕。本试剂盒至少可以检测200个样品。包装清单：产品编号产品名称包装S0026-1ATP检测试剂0.2ml(50μl/管，共4管)S0026-2ATP检测试剂稀释液20mlS0026-3ATP标准溶液(0.5mM)0.1mlS0026-4ATP检测裂解液100ml—说明书1份保存条件：-20℃保存，半年有效。-70℃保存，一年有效。ATP检测试剂需避光保存。

4、注意事项：ATP检测试剂中含有荧光素酶，反复冻融会导致其逐渐失活。为取得较好的使用效果，冻融的次数不宜超过3次。ATP检测试剂稀释成ATP检测工作液后，最好一次用完，不宜冻存后再使用。ATP，特别是裂解后样品中的ATP在室温不太稳定，需在4℃或冰上操作。ATP在冰上可以稳定长达6小时。本试剂盒需使用luminometer(检测荧光素酶报告基因时所用的仪器)。如果没有luminometer，也可以使用液闪仪。液闪仪的测定效果取决于液闪仪的检测灵敏度和检测精度。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一

5、次性手套操作。使用说明：1.样品测定的准备：(注意：样品裂解需在4℃或冰上操作)对于贴壁细胞：吸除培养液，按照6孔板每孔加入200微升裂解液的比例(即相当于细胞培养液量2毫升的1/10)加入裂解液，裂解细胞。裂解细胞时为了裂解充分，可以使用移液器进行反复吹打或晃动培养板使裂解液充分接触并裂解细胞。通常细胞在接触裂解液后会立即裂解。裂解后4℃12000g离心5-10分钟，取上清，用于后续的测定。对于悬浮细胞：用离心管离心沉淀细胞，弃上清，轻轻弹散细胞，按照6孔板每孔的细胞量加入200微升裂解液的比例加入

6、裂解液，裂解细胞。裂解细胞时为了裂解充分可以弹击离心管管底或适当Vortex使裂解液充分接触并裂解细胞。通常细胞在接触裂解液后会立即裂解。裂解后4℃12000g离心5-10分钟，取上清，用于后续的测定。对于组织样品：按照每20毫克组织加入约100-200微升裂解液的比例加入裂解液，然后用玻璃匀浆器或其它匀浆器进行匀浆。充分匀浆可以确保组织被完全裂解。裂解后4℃12000g离心5-10分钟，取上清，用于后续的测定。2.标准曲线测定的准备：冰浴上溶解待用试剂，把ATP标准溶液用ATP检测裂解液稀释成适当的

7、浓度梯度。具体的浓度需根据样品中ATP的浓度而定。初次检测可以检测0.1、1和10微摩尔/升这几个浓度，在后续的实验中根据样品中ATP的浓度对标准品的浓度进行适当调节。3.ATP检测工作液的配制：按照每个样品或标准品需100微升ATP检测工作液的比例配制适当量的ATP检测工作液。把待用试剂在冰浴上溶解。取适当量的ATP检测试剂，按照1:100的比例用ATP检测试剂稀释液稀释ATP检测试剂。例如50微升ATP检测试剂可以加入5毫升ATP检测试剂稀释液配制成5毫升ATP检测工作液。稀释后的ATP检测试剂即

8、为用于后续实验的ATP检测工作液。ATP检测工作液可在冰浴上暂时保存。4.ATP浓度的测定：（1）加100微升ATP检测工作液到检测孔或检测管内。室温放置3-5分钟，以使本底性的ATP全部被消耗掉，从而降低本底。可以一次性把10-20个检测孔或检测管分别加上100微升ATP检测工作液，从而节省时间。（2）在检测孔或检测管内加上10-100微升样品或标准品，迅速用枪(微量移液器)混匀，至少间隔2秒后，立即用luminometer或液闪仪测定RLU值或CPM