PCR引物设计原理及方法

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1、PCR引物设计基本思路1.根据实验需要，确定需要扩增的DNA序列，并知道其CDS区序列（编码结构基因区,即从起始密码子区至终止密码子区）ncbi网站查询RBS149..153/gene="eryF"CDS158..1372/gene="eryF"1ggatcccgatcgtgtcggaggaagaggccaagtcgcgccgccccgaccagctgctggtgc61tgccctggatctaccgcgacgggttcgtcgaacgcgagcaggagttcctcgctggcggcg121gaaagctgatcttccccctaccccgactggaagtcgtatgacga

2、ccgttcccgatctcga181aagcgactccttccacgtcgactggtaccgcacctacgccgagctgcgcgagaccgcgcc241ggtgacgccggtgcgcttcctcggccaggacgcgtggctggtcaccggctacgacgaggc301gaaggccgcgctgagcgacctgcgcctgagcagcgacccgaagaagaagtacccgggcgt361ggaggtcgagttcccggcatacctcggtttccccgaggacgtgcggaactacttcgccac421caacatgggcaccagcgacccg

3、ccgacccacacccggctgcgcaagctggtgtcgcagga481gttcaccgtccgccgcgtggaggcgatgcggccccgcgtcgagcagatcaccgcggagct541gctcgacgaggtgggcgactccggcgtggtcgacatcgtcgaccgcttcgcccacccgct601gcccatcaaggtcatctgcgagctgctcggcgtcgacgagaagtaccgcggggagttcgg661gcggtggagctcggagatcctggtcatggacccggagcgggccgaacagcgcgggcaggc721

4、ggccagggaggtcgtcaacttcatcctcgacctggtcgagcgccgccgcaccgagcccgg781cgacgacctgctgtccgcgctgatcagggtccaggacgacgatgacggtcggctcagcgc841cgacgagctgacctccatcgcgctggtgctgctgctggccggtttcgaggcgtcggtgag901cctcatcgggatcggcacctacctgctgctcacccacccggaccagctcgcgctggtgcg961gcgggacccgtcggcgctgcccaacgccgtcgaggagatcc

5、tgcgctacatcgctccgcc1021ggagaccaccacgcgcttcgccgcggaggaggtggagatcggcggtgtcgcgatccccca1081gtacagcacggtgctggtcgcgaacggcgcggccaaccgcgacccgaagcagttcccgga1141cccccaccgcttcgacgtcacccgcgacacccgcggccacctgtcgttcgggcagggcat1201ccacttctgcatgggccggccgctggccaagctggagggcgaggtggcgctgcgggcgct1261gttcggccgcttcc

6、ccgctctgtcgctgggaatcgacgccgacgacgtggtgtggcggcg1321ttcgctgctgctgcggggcatcgaccacctaccggtgcggctcgacggatgagcacctgg1381ctgcggcggttcggtcctcccgtcgagcaccgggcgcggctggtgtgcttcccgcacgcg1441ggagccgcggccgactcctacctcgacctcgcgcgcgccttggcgcccgagatcgacgtg1501cacgccgtgcagtacccggggcgccaggaccgccgcgacgaggagcccctg

7、ggcaccgcc1561ggcgagatcgccgacgaggtggccgccgtgctgcgcgcgtcgggcggcgacggcccgttc1621gccctgttcgggcacagcatgggcgcgttgatcgcctacgagacggcgcgcaggctcgaa1681cgcgagcccggcggcgggccgctgcggctgttcgtgtccgggcagaccgccccgcgcgtg1741cacgagcgccgcaccgacctgcccggcgacgacggtc