《蛋白纯化系统》PPT课件

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1、BioLogicDuoFlow中高压层析系统层析原理与操作为什么做蛋白质纯化？原理与操作纯度均一的蛋白质才能满足物理化学性质研究、生物活性测定、免疫学性质、结构分析、药理毒理实验的要求，以揭示生命科学的规律。研究开发、中试生产蛋白质药物用于诊断和治疗。实验室研究A、天然生物样品纯度均一的蛋白质纯化B、重组基因工程药物C、蛋白质组研究差异蛋白质质谱测序克隆表达分离纯化蛋白质是生命科学研究的基本且必要的技术手段，也是生物制品药物生产的最重要的工艺步骤！其他生物分子分离纯化原理与操作其他生物大分子：DNA，多糖生物小分子：多肽和小

2、肽，核苷酸，寡糖和单糖，多环和杂环用途：用于性质、活性等研究需要用于治疗和诊断的药物用于生物、化工或食品等轻工领域的生化试剂离心沉淀超滤电泳层析(Chromatography)生物分离纯化技术原理与操作Model491，RotoforNote:蛋白质分离纯化的重要问题是如何在纯化过程中保持温和的条件，从而保证在此过程中蛋白质的结构和活性不受影响。最广泛的蛋白质分离纯化方法条件温和维持蛋白质空间结构与活性什么是生物层析根据生物分子物理化学特性的不同而达到分离极性：polarity(solubility,volatility)H

3、IC,RP离子特性：ioniccharacteristics(charge)IEX大小与形状：size/mass(diffusion,sedimentation)GF结构特征与活性位点：shape(ligandbinding,affinity)AC这些特性的区别使不同生物分子分子在层析的固定相和流动相的分配不同而达到分离原理与操作层析技术IonExchange(IEX)－离子交换电荷–可用于层析的任何步骤，根据纯度要求，包括粗纯捕获、中间纯化和最后的精细纯化SizeExclusion(SEC)－分子筛（或凝胶过滤）分子大小–

4、用于中间纯化、脱盐和缓冲液交换、最后精细纯化Affinity(AC)－亲和生物相互作用–用于复杂样品的最早捕获或中间纯化HydrophobicInteraction(HIC和RP)－疏水和反相疏水相互作用-用于中间纯化，去除脂类和脂多糖CeramicHydroxyapatite(CHT)&CeramicFluoroapatite(CFT)－羟基磷灰石独特分离机理，包含离子交换和金属螯合等,可用于层析的任何步骤，根据纯度要求，包括粗纯捕获、中间纯化和最后的精细纯化原理与操作层析的5个操作步骤装柱并平衡上样平衡洗脱再生上样装填有

5、层析介质的层析柱分离分离组分流出原理与操作原理与操作层析图第一峰,外水体积,Vo,不与柱中填料相互作用直接从柱中流出。这是样品中的未结合物质VoVeVt蛋白质含量(A280),由UV检测器读出，y轴基线洗脱峰，有些可以很好的分离，有些分得不是很好，有部分交叉时间或体积，x轴液相层析系统的工作流程用Pump推动溶液…各种Valve系统选取溶液控制流向通过Column时不同蛋白分子与填料作用强度不同因而迁移速度不同从而分开…Column洗脱液包含的蛋白….通过检测器确定位置和浓度FractionCollector收集样品原理与操

6、作液相层析系统仪器结构DuoFlow10/40系统DuoFlow工作站电导检测器MX-1梯度混合器AVR7-3样品进样阀USBBitbus信号转换器液晶显示器电脑BioFrac方形组分收集器UV检测器DuoFlow中高压层析系统Maximizer阀系统QuadTec紫外/可见检测器Maximizer混合器SV5-4阀AVR9-8阀pH检测器DuoFlowBasicDuoFlowQuadTecMaximizerPathfinderDuoFlow中高压层析系统工作流程DuoFLow生物相容性100%bio-compatib

7、le所有接触溶液的系统以新型塑料peek为主溶液系统不接触任何金属件，避免蛋白变性和吸附化学稳定性化学稳定性基本特征DuoFLow兼容所有层析填料基本特征DuoFLowF10梯度泵：20.0ml/minat3500psi(233bar,23MPa)高压中流速的泵头可满足HPLC高压液相分析和小规模制备的要求F40梯度泵：80ml/minat1000psi(66bar,6.6MPa)中压高流速的泵头可满足大规模制备，包括中试和生产的要求DuoFLow特色:可更换的双泵头只要旋下泵头前的4根螺丝，将另一泵头安上即可实现高压中流速

8、和中压高流速的切换DuoFlow可将高压中流速和中压高流速两种仪器的性能通过独特的泵头更换技术整合在一台仪器中。灵活多样、功能强大的扩展配置DuoFLow特色EasytolearnSoftware强大的分析、管理和报告功能，通过软件整合和控制所有硬件:Maximizer,QuadTec,