《疫学技术》PPT课件(I)

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1、免疫学技术【应用于免疫分析】小组成员：吴一帆姚佳祺项卫敏免疫学测定的中心问题作为免疫反应，抗原抗体的选择是整个免疫分析特异性和总体表现的关键如何选择好一个抗体去检测一个被检物质，而不与非常相似结构的其它物质有交叉反应，或漏掉须反应的物质，这是分析设计的重中之重抗体的量必须恰当，过多会引起复合物的溶解关于抗体的亲合力抗体除了要求纯度外（单价特异性）还必须要求亲合力，效价指抗体的量，亲合力指抗体的质在非竞争免疫反应的模式中抗体亲和力比标记物的最低检测极限更能影响分析的灵敏度在竞争法免疫反应的模式中抗体亲和力直接关系到竞争的结果对于样

2、品中的干扰物质,亲合力影响分析的抗干扰的能力免疫分析的工作定义免疫分析(Immunoassay)是一种测试方式,使用特殊的抗体与被检测物质的结合,此被检测物质不能通过简单的化学方法所容易检测到的.通常在检测系统中会使用到一种叫标记物（labeling）的物质,常标记在抗体上通常会有一个分离（separation）的过程在最后读取信号前总是需要去仔细关注一下分析的模式（format）Access的技术免疫分析-“what”检测技术–化学发光分离技术–磁性颗粒分析模式–灵活-“how”}分析模式检测技术分离技术检测技术免疫分析检测技

3、术(Detection)–有许多可用的方法应用一些“标记物”所产生的一些能量进行测定标记物可以或可以不被激活而产生能量通过一些相应的检测器对标记物产生的能量进行测定分离技术分析模式放射免疫分析(Radioimmunoassay)优势优秀的灵敏度较宽的检测线性范围局限性标记物的半衰期短试剂效期短检测结果的重现性差每次检测都要做标准曲线分析的反应时间长，半天~2天发射性污染有害很难实现自动化检测分离技术免疫分析检测技术分离技术(Separation)–有很多方式典型的是,特异性结合的分析物被保留而未结合物质和无用的反应物被清除分析模

4、式技术的创新微粒子包被珠包被微孔包被管包被磁颗粒包被技术磁颗粒抗体包被技术磁颗粒均匀的悬浮于整个反应体系分析物在磁颗粒表面捕获磁颗粒在磁场中被清洗磁颗粒重新悬浮十分容易优势快速的反应动力学较少的样品量提高检测的灵敏度极好的批内重显性可以探针取放，实现自动化分析模式免疫分析检测技术分离技术分析模式-有很多种方式可定义为分析的“处方”设定一个最优化的模式(可变量)去最优化项目的临床应用分析模式可变量夹心法(Sandwich)vs.竞争法(competitive)标记物的放置同步(Simultaneous)vs.分步(sequenti

5、al)试剂/样品加入的顺序孵育的次数(步骤)清洗分离的次数(步骤)试剂/样品的体积/浓度孵育的时间孵育的温度Access的分析模式基本分析模式夹心法(Sandwich)竞争结合(Competitivebinding)试剂的加入，孵育和清洗同步(Simultaneous)(1步,1次清洗)分步(Sequential)(2步,2次清洗)“Piggyback”(2步,1次清洗)夹心法分析模式捕捉抗体(Captureantibody)和标记抗体(labeledantibody)每个不同的抗体可以针对不同的抗原决定簇，或二个在同一个抗原决

6、定簇分析更特异因为二个抗体同时反应适合于检测大分子物质bhCGTSHIgEProlactinFSHLHFerritinHBsAg竞争法分析模式只有捕捉抗体主要针对小分子物质检测没有足够表面积的分析物去符合“夹心法”要求T3FT3B12DigoxinProgesteroneT4FT4FolateCortisolEstradiol分析模式的选择需考虑的因素分析物的特征体积（竞争法还是夹心法）浓度（一步法，二步法，反应时间等）潜在的“钩状效应”（hookeffect）-假阴性解决的方法可以使用2步法模式样品量和试剂量的平衡抗干扰能力仪

7、器的能力／局限性预处理的要求案例:hLH抗原位点图BetaAlphaB-D1hTSHhCGB-D2hCGA-D1hCGhFSHhTSHB-D3A-D3A-D2hCGhFSHhTSH抗体的选择等分子(Equimolar)vs.非等分子(non-equimolar)分析依赖于特异性抗体的选择结合模式-一些位点被隐藏游离模式-所有位点都暴露PSAACTPSA嗜异性抗体(HeterophileAntibody)病人样品中可能自然产生一些针对动物免疫球蛋白的抗体(通常是鼠或羊)来源于暴露于这些动物或接受过动物血清的治疗分析的干扰可以在双单

8、克隆夹心法分析模式中引起假阳性可以在单克隆/多克隆分析模式中出现假阴性免疫分析设计及优化开发免疫分析试剂盒的过程就是选择并优化各种实验条件，达到预期结果并能准确反应临床真实情况的过程抗原/抗体分析模式分离技术检测技术总体分析表现心肌钙蛋白和心脏疾病cTnI的水平