《其他类型的ELISA》PPT课件

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1、其他类型的ELISA1.阻断ELISA本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎（TGE）、猪伪狂犬病（PR）及猪胸膜肺炎（AP）的主要检测方法。以AP2型抗体的阻断ELISA检测法为例介绍其操作程序：(1)100μlAP2型工作量抗原包被→4℃过夜，洗涤三次、抛干。(2)用200μl阻断缓冲液进行封闭→37℃60分钟，洗涤三次、抛干。(3)加工作量1:4稀释被检猪血清100μl→37℃60分钟，洗涤三次、抛干。(4)加100μl工作量兔抗AP2型血清→37℃30分钟，洗涤三次、抛干。(5)加100μl工作量猪抗兔

2、IgG-HRP→37℃60分钟，洗涤三次、抛干。(6)加100μlOPD底物液→37℃20分钟，加终止液。(7)用ELISA检测仪测定OD值。试验中同时设标准阴、阳性血清对照、兔抗AP2型阳性对照、空白对照。（2）抗体捕捉ELISA本法主要用于检测IgM抗体。由于IgM抗体出现于感染早期，所以检测出IgM，则可作为某种疾病的早期诊断。抗体捕捉ELISA根据所用标记方式不同可分为标记抗原、标记抗体、标记抗抗体捕捉ELISA等几种，其中以标记抗原捕捉ELISA比较有代表性，IgM抗体捕捉酶联免疫吸附试验(IgMantibodycapt

3、ureELISA，简称MAC-ELISA)或反向间接ELISA法是利用抗人Igm(μ链特异性)抗体包被固相载体，作为“捕捉抗体”吸附待检血清中的Igu。经过洗涤除去血清中IgC及其他成分，再加入特异性抗原与“捕捉”到的相应IgM抗体结合；然后加入酶标抗体和底物显色进行测定。该方法的主要程序为：①用抗u链（抗IgM重链）抗体包被→37℃60分钟后置4℃过夜，洗涤三次、抛干②加待检血清→37℃2小时，洗涤三次、抛干③加酶标抗原→37℃60分钟，洗涤三次、抛干④加底物液→37℃20分钟，加终止液⑤用ELISA检测仪测定OD值。(3)布E

4、LISA（C－ELISA）C－ELISA（Cloth-ELISA）是加拿大学者Blais,B.W.等于1989年建立的一种新型免疫检测技术。该方法是以疏水性聚脂布（HydrophobicPolyesterCloth）即涤纶布为固相载体，这种大孔径的的疏水布具有吸附样品量大，可为免疫反应提供较大的表面积，提高反应的敏感性，且容易洗涤，不需特殊仪器等优点。其基本原理与Dot-ELISA类似，只是载体不同。以对布氏杆菌抗原的检测为例，C－ELISA的主要程序为：(1)首先把抗布氏杆菌的血清包被（吸附）在聚脂布上，并经洗涤及封闭；(2)加

5、被检样品并于室温下感作30分钟，然后洗5次；(3)加酶标记的抗布氏杆菌抗体，于室温下感作30分钟，然后洗涤5次；(4)加入底物液显色；(5)测定OD值。