ww50感染量或50组织细胞感染量ID50或

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1、*50%感染量或50%组织细胞感染量(ID50或TCID50)测定法用半数感染量可估计病毒感染性的强弱及含量，但不能准确测定感染性病毒颗粒的数量。方法是测定病毒能使50%的组织培养细胞发生感染的最小量。一般是将病毒悬液作10倍的系列稀释，分别接种细胞，经一定时间后观察CPE、血细胞吸附等指标，以最高稀释度能感染50%细胞的量为终点。最后用统计方法计算出50%感染量(ID50)或50%组织细胞感染量(TCID50或TCD50)二病毒的增殖（一）病毒的增殖方式病毒的增殖方式是复制。因病毒不具有能独立进行代谢的酶系统，因此在细胞外是处于无活性或静止状态。只有进入活的易感宿主细胞，由宿主细胞供给合

2、成病毒核酸与蛋白质的原料，如低分子量前体成分、能量、必要的酶和细胞器等，病毒才能增殖（二）病毒复制周期1吸附与穿入病毒的增殖首先吸附在宿主细胞后方可穿入（1）吸附有两种：①病毒与细胞的静电结合病毒和细胞在生理pH条件下均带阴电荷，因而可互相排斥，除随机的碰撞外，一般较少相互吸引。如有阳离子存在，则可促进结合。但这种结合是非特异的和可逆的；②宿主细胞表面受体与病毒表面结构成分的特异结合，这是真正的结合（2）病毒的穿入病毒可通过数种方式穿入细胞膜，即吞饮、融合和转位：①吞饮即病毒与细胞表面结合后内凹入细胞，细胞膜内陷形式类似吞噬泡，病毒原封不动地进入细胞浆内。无包膜的病毒多以吞饮形式进入易感动

3、物细胞内；②融合是指病毒包膜与细胞膜融合，而将病毒的核衣壳释放至细胞浆内病毒体吸附细胞的过程可在几分钟到几十分钟内完成2脱壳病毒脱去蛋白衣壳后,核酸才能发挥作用。多数病毒穿入细胞之后，随即由细胞溶酶体酶的作用，使衣壳蛋白质水解,露出病毒核酸。但痘病毒特殊，分为两步脱壳。先由溶酶体酶作用脱去外壳蛋白质，病毒核心(含有内层衣壳和核酸)释放于细胞浆中，然后再经病毒编码产生一种脱壳酶，脱去内层衣壳方能释放出核酸3生物合成病毒脱壳之后，接着就进入病毒复制的生物合成阶段，即病毒利用宿主细胞提供的低分子物质合成大量病毒核酸和结构蛋白。生物合成阶段用血清学方法和电镜检查在细胞内找不到病毒颗粒，故称其为隐

4、蔽期。各病毒的隐蔽期长短不一，如脊髓灰质炎病毒是3-4h，正粘病毒7-8h，副粘病毒11-12h，腺病毒16-17h。隐蔽期实则是在病毒基因控制下进行病毒核酸和蛋白质合成的阶段。病毒核酸复制部位因核酸类型不同而异。DNA病毒除痘病毒外，都在细胞核内复制；RNA病毒除正粘病毒和逆转录病毒在细胞核内复制外，其余都在细胞浆内复制由于病毒核酸类型不同，病毒的生物合成过程基本归为6类，DNA病毒包括双链DNA病毒和单链DNA病毒；RNA病毒包括单正链RNA病毒、单负链RNA病毒、双链RNA病毒及逆转录病毒(1)双链DNA病毒首先利用宿主核内的依赖DNA的RNA多聚酶，转录早期mRNA，再于胞浆内的

5、核糖体转译成早期蛋白。早期蛋白主要包括依赖DNA的DNA多聚酶及脱氧胸腺嘧啶激酶，以利用其合成子代DNA分子。再以子代DNA分子为模板转录多聚成大量晚期mRNA，继而在胞浆核糖体上转译出病毒结构蛋白，主要为衣壳蛋白双链DNA复制为半保留复制形式。即亲代DNA的双链在解链酶作用下，解开成为正、负两个DNA单链。再分别以这两条单链为模板，在DNA酶的作用下，按照核苷酸碱基配对的规律，分别合成互补的DNA(负链或者正链)，为新合成的双链DNA，即为子代DNA。通过此复制过程，生成大量与亲代结构完全相同的子代DNA(2)单链DNA病毒是以亲代DNA作模板，在DNA多聚酶的作用下，产生互补链，并与亲

6、代DNA链形成±dsDNA，作为复制中间型，即DNARI。然后再以半保留形式进行复制(3)正单链RNA病毒由于该病毒RNA具有mRNA功能，其RNA可直接附着于宿主细胞的核糖体上转译早期蛋白-依赖RNA的RNA多聚酶。在该酶的作用下，转录出与亲代正链RNA互补的负链,以此为模板复制出子代RNA(4)负单RNA病毒大多数有包膜病毒属于此类，如流感病毒、狂犬病病毒等。这些病毒含有依赖RNA的RNA多聚酶。病毒RNA在此酶的作用下，首先转录出互补正链RNA，形成RNARI(±RNA)。再以RI的正链RNA模板起mRNA作用，转录出与其互补的子代负链RNA，再转译出病毒结构蛋白和酶(5)逆转录

7、病毒首先以病毒RNA为模板，在逆转录酶的作用下合成互补的DNA链，构成RNA：DNA中间体。中间体中的RNA由RNA酶H水解，在DNA多聚酶作用下由DNA复制成双股DNA。该双股DNA则整合至宿主细胞的DNA上，成为前病毒(provirus)，前病毒还可核内经细胞的依赖DNA的RNA多聚酶转录成病毒的mRNA和子代RNA。mRNA在胞浆核糖体上转译出子代病毒的蛋白质细胞细胞表面的病毒受体1111吸附1吸附1吸附2穿入3脱