育种出发菌的分离筛选

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1、第五章育种出发菌的分离筛选向菌种保藏机构索取有关的菌株。菌种来源的途径国内外著名的菌种保藏机构有：CCCCM(中国微生物保藏管理委员会）ATCC(美国典型菌种保藏中心）NCTC(英国国家典型菌种保藏所)IFO(大阪发酵研究所)2.从一些发酵制品中分离目的菌株。容易筛选到较理想的菌株。3.由自然界采集样品中获得。如土壤、水、动植物体等，从中进行分离筛选。容易发现新的菌株资源。2021/10/82菌株分离与筛选菌株分离(separation)：是将样品中混杂生长的各种微生物通过分离技术区分开，获得所需微生物的过程。菌株筛选(screening)：在目的菌株分离的基础上，结合常规生产性能测定，

2、选择目的产物合成能力相对高的菌株的过程。2021/10/83菌株分离和筛选2021/10/84第一节含微生物样品的采集第二节含微生物样品的富集培养第三节微生物的分离第四节野生菌株筛选和目的产物鉴定主要内容2021/10/85第一节含微生物样品的采集2021/10/86含微生物样品的采集一、从土壤中采样1根据土壤特点采集①土壤有机质含量和通气状况2021/10/87典型的土壤层次结构AsoilprofileＯＡBＣ堆积枯枝落叶，下部已初步分解腐殖质含量高，与矿物颗粒紧密结合形成暗色土层物质淋失，颜色较浅淋滤层淋移物质在沉积层沉积，多形成核状、柱状、棱状结构，较紧实土层较深，受成土因素影响小

3、，保持母质特性2021/10/88不同土壤类型2021/10/89③地理条件南方土壤比北方土壤中的微生物数量和种类都要多。④季节条件秋季是采样的良好季节②土壤的酸碱度2021/10/8102土壤中采样的方法选点取土装袋标记用取样铲，将表层5cm左右的浮土除去，取5-25cm处的土样10-25g，记录地点、土壤质地、植被名称、时间及其他环境条件2021/10/811二、根据微生物生理特点采样①根据微生物营养类型微生物的营养需要和代谢类型与其生长环境有着很大的相关性。在筛选一些具有特殊性能的微生物时，需根据该微生物独特的生理特性到相应的地点采样。②根据微生物的生理特性2021/10/812①

4、局部环境条件。如：海洋、肠道、温泉、堆肥②极端环境条件。在绝大多数微生物所不能生长的高温、低温、高酸、高碱、高盐或高辐射强度的环境下，也有少数微生物存在，这类微生物被称为极端环境微生物。三、特殊环境下采样2021/10/813第二节含微生物样品的富集培养2021/10/814富集(enrichment)培养：是在目的微生物含量较少时，根据微生物的生理特点，设计一种选择性培养基，并创造有利的生长条件，使目的微生物在合适的环境下迅速生长繁殖，由原来自然条件下的劣势种变成人工环境下的优势种，以利分离到所需要菌株的过程。富集培养主要根据微生物的碳源、氮源、pH、温度、需氧情况等生理因素加以控制。

5、2021/10/815一、控制培养基的营养成分二、控制培养条件通过对pH、温度及通气量等其他一些条件的特殊要求加以控制培养，达到有效的分离目的。如pH细菌、放线菌：一般要求偏碱(pH7.2-7.5)，霉菌和酵母菌：要求偏酸(pH4.5-6)。2021/10/816三、抑制不需要的菌类通过高温、高压、加入抗生素等方法减少非目的微生物的数量，使目的微生物的比例增加，达到富集的目的。如：硫乙醇酸钠－－造成厌氧环境，利于厌氧菌生长。抗生素－－可抑制细菌生长，用于培养霉菌。2021/10/817被分离的微生物添加物质及其浓度被抑制的微生物放线菌放线菌酮（50），制霉菌素（50），环己亚氨（50），

6、匹马霉素（50），丙酸钠（4mg）霉菌革兰氏阴性菌其他革兰氏阳性菌环己亚氨+多黏菌素+枯草菌素（各20单位），多黏菌素B（5）+青霉素（1）细菌放线菌酮（50-500），制霉菌素（100），优洛杀菌素（30-100）（eu-rocidin）霉菌、酵母菌原虫霉素（5）原生动物革兰氏阳性菌多黏菌素B（5）革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌青霉素（1），月桂酸钠（2mg）革兰氏阳性菌酵母菌氯霉素（100），青霉素（20）+链霉素（40），玫瑰红（50）+放线菌酮（10）细菌放线菌酮霉菌霉菌菌氯霉素（100），青霉素（20）+链霉素（40），玫瑰红（35-67）氯霉素（50）+放线菌酮（10），青霉素（1

7、00）细菌细菌、酵母菌2021/10/818第三节微生物的分离2021/10/819一、好气微生物的分离分离的方法很多，可分为“菌落纯”和“菌株纯”。1稀释涂布法2021/10/8202划线分离法2021/10/8213利用生化反应进行分离饱浸含某种指示剂的固体培养基的滤纸片变色圈固体培养基中渗入溶解性差、可被特定菌利用的营养成分，造成不透明的培养基背景。菌落利用此物质形成透明圈。利用某种营养缺陷型微生物作为指示菌，若待筛选菌具有将