液相色谱系统

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1、液相色谱系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。液相色谱仪分离过程是储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来第二质谱仪分析原理质谱仪按应用范围分为同位素质谱仪、无机质谱仪和有机质谱仪；按分辨能力分为高分辨、中

2、分辨和低分辨质谱仪；按工作原理分为静态仪器和动态仪器。质谱仪能用高能电子流等轰击样品分子，使该分子失去电子变为带正电荷的分子离子和碎片离子。这些不同离子具有不同的质量，质量不同的离子在磁场的作用下到达检测器的时间不同，其结果为质谱图。质谱仪以离子源、质量分析器和离子检测器为核心。离子源是使样品分子在高真空条件下离子化的装置。电离后的分子因接受了过多的能量会进一步碎裂成较小质量的多种碎片离子和中性粒子。它们在加速电场作用下获取具有相同能量的平均动能而进入质量分析器。质量分析器是将同时进入其中的不同质量的离子，按质荷比m/e大小

3、分离的装置。分离后的离子依次进入离子检测器，采集放大离子信号，经计算机处理，绘制成质谱图。离子源、质量分析器和离子检测器都各有多种类型。近几年来液-质联用技术得到广泛使用的原因是液相色谱能够高效分离和定量样品，但是不能知道样品中各种物质是什么，再通过质谱分析就可以鉴定样品，进而研究样品的分子功能。第三我们看一下液-质联用技术与双向电泳比较1误差小双向电泳分析样品时，经过一向等电聚焦，二向按分子量大小分离后，必须用软件进行分析，画点，比对，但是经过这两个软件分析过程中人为误差比较大。而用液相色谱分析样品时，样品浓度以电信号方式

4、表示出来，人为误差较小。2速度快双向电泳分析样品最快要两天时间，用液相色谱分析样品仅用十几分钟就可以了。3分辨率高4液相色谱柱可重复使用5自动化操作，分析精确度高第四液-质联用技术的应用1用于植物系统的分析非标记液-质联用技术用于比较野生型拟南芥和拟南芥缺乏葡萄糖磷酸变位酶活性（PGM）突变体分析，并结合代谢物特征，肽的量化，生物信息学分析，相应数据显示一些蛋白和代谢物有助于区分野生型和PGM型。2植物离体细胞器的分析大多数研究利用双向电泳技术植物细胞几个亚细胞部分进行了研究，包括叶绿体、线粒体、核、液泡、过氧化物酶、微粒体

5、膜、质膜和细胞壁、质外体。但是由于一些蛋白质在细胞器中的表达量太低，用双向电泳很难分离和鉴定，而液-质联用技术可以较好地分离和鉴定低丰度蛋白质，进而深入研究确定细胞器中蛋白质的分子功能。3蛋白质组分的分析嵌入式膜蛋白质在营养、水的运输、感觉和信号转导过程是必不可少。植物膜蛋白质的特性化是非常理想的，因为膜蛋白的低丰度和不同的生化特性，应用以凝胶为基础的蛋白质分析方法是行不通的，所以经常运用液-质联用技术分析膜蛋白质。4翻译后修饰的分析翻译后修饰的阐明是蛋白质组研究中最具挑战性的课题，液-质联用技术可以大规模鉴定磷酸化点。因为

6、磷酸化蛋白质是蛋白质组的一小部分，需要在定量和鉴定之前有效的富集，一些预分离技术，如：固定金属亲和层析（IMAC）和免疫共沉淀技术得到广泛的应用。应用液-质联用技术在花椰菜中发现了新的水通道蛋白亚型，揭示了多种多样的翻译后修饰，如乙酰化，甲基化和磷酸化。