探讨新近发现的人畜共患病原菌--猪螺杆菌

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1、探讨新近发现的人畜共患病原菌--猪螺杆菌1历史在猫、狗和猴等多种动物胃内发现存在螺旋样细菌(Gastrospirillum),被认为是居栖于胃底腺区的正常菌群,无病原学上的意义[4]。但是,自Warren,J.R.等(1983)在活动性溃疡性胃炎病人胃粘膜上发现弯曲样杆菌来,并证实系胃炎、胃溃疡、胃淋巴组织淋巴瘤等发病原因(Marshall,B.J.等,1984)[5],进而引起在人类胃病发生原因和防治等重大变革。Mendes,E.N.等[4](1990)应用透射电镜技术首次发现猪胃窦凹陷部位存在螺

2、旋样菌,并命名为猪胃螺旋菌(Gastrospirillumsuis,G.suis),它不同于人幽门弯曲杆菌(Campylobacter,pylori)或幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,HP)。Queiroz,D.M.M.等[6](1990)有类似的发现。由于PCR技术、基因序列分析和分子生态等技术的应用,将弯曲杆菌属(GenusCampylobacter)修正为新的螺杆菌属(GenusHelicobacter),同时,将猪胃螺旋菌更名为暂定猪螺杆菌(CandidatusHelico

3、bactersuis,Can.H.suis)[8]。与人胃螺杆菌I型(H.heilmanniiI)类似(Queiroz,D.M.M.等,1990[6];Cantet,F.等[7],1999)。基因序列分析与H.heilmannniiI型同源99.5%(DeGrooteD.等,1999)[8]。后来,O`Rourke,J.L.等[9](2004)也证实此菌与H.heilmannniiI型有较高的同源性,视为同一菌种。但期间,其命名较为混乱,有称非幽门螺杆菌胃螺杆菌(Gastricnon-H.pylor

4、ihelicobacters,GNHPH;Non-helicobacterpylorihelicobacter,NHPH)[3][10],幽门样螺杆菌(Helicobacterpylori-likebacteria,HPLB)[11],胃螺旋样菌(Gastrospirillum-likeorganisms,GLOs)[12],螺杆菌样菌(Helicobacter-likeorganisms,HLOs)等[13]。最新将其命名为猪螺杆菌(Helicobactersuissp.nov.,)[1]。2病原

5、学用病理组织形态学方法对螺杆菌研究报告较多[2][3][5][22][33]。Roosendaal,L.D.等[14](2000)对122头屠宰猪中的胃窦部和食管部112份样本螺杆菌培养,均未成功。因长期体外培养不成功[2][4][8][14],影响对其形态深入系统的研究。直到2008年才取得突破[1]。2.1形态特征Baele,M.等[1](2008)首次成功从猪胃炎和胃食道部溃疡部位分离3菌株(HS1、HS2和HS3)猪螺杆菌(H.suis)。菌体呈多至6个紧密盘绕螺旋样,长约2.3-6.7μm

6、,宽约0.9-1.2μm,无周质纤毛。老培养物,菌体多呈球状,革兰氏染色阴性,不形成孢子。通过菌体两端的4-10个有鞘鞭毛丛的作用而显极强的运动性,鞭毛末端饨状,部分呈球节状,大于鞭毛体平均直径2倍。2.2培养及生化特征在添加20%胎儿牛血清或10%去纤维马血的BHI琼脂,布氏琼脂和Mueller-Hinton琼脂生长。在微氧条件生长,在5%CO2条件下不生长。厌氧条件生长缓慢,37℃生长良好,25℃和42℃不生长。在1.5%NaCL,1%氨基乙酸,1%牛胆汁或5μgml-1甲硝达唑培养基中不生长。

7、氧化酶,过氧化氢酶,尿素酶阳性。TTC、脂酶减少。γ-谷氨酰基转移酶,L-精氨酸芳基酰胺酶和碱性磷酸酶活性强。不水解马尿酸盐和吲哚醋酸盐,硝酸盐量不减少。不产生吡咯烷酮芳基酰胺酶,L-天冬氨酸芳基酰胺酶。2.3分子生物学特征Baele,M.等[1](2008)应用16SrRNA基因测序方法,FISH和电子显微镜技术证明分离的3株猪螺杆菌不同于已报告的螺杆菌属的细菌,属于新菌种。按QiqgenTaqMastermix试剂盒操作手册,对3株菌株制备测定DNA基因序列抽提物。参照DeGrooteD.等[8

8、](1999)PCR扩增Can.H.Suis的16SrRNA的433bp基因片断(Ca.H.suis)。三菌株间,和与Can.H.suis菌株的同源性均大于99%。与此相近的菌株是Can.H.heilmannnii,H.felis,H.bizzozeronii,H.salomonis和H.cynogastricus,同源性在94.4-96.2%,但差异性是显著的。ureA和ureB基因片断用U430F和U1735R引物按O`Rourke等[9](2004)方法扩增,结

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