高速定向凝固溶质偏析的相场法数值模拟.pdf

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1、#%%!第!"卷!第#期!$%%"年#月促减数分裂甾醇#+?7$对猪卵母细胞体外成熟及其胚胎发育能力的影响"潘登科!刘!吉!牟玉莲!张!莉!冯书堂""中国农业科学院北京畜牧兽医研究所基因与细胞工程室!北京!"""M)摘要!!利用促减数分裂甾醇$@*H%合成代谢过程中的抑制剂*ZMM))累积<<’@*H的原理!在猪卵母细胞体外成熟过程中添加*ZMM))!间接地研究了内源性@*H对猪卵母细胞体外成熟质量的影响9猪卵丘卵母细胞复合体$8G/G2GDBB8C648B/32454D!,=,D%培养在],Hc%(成熟培养液中!并

2、添加不同浓度$"!!"!%"!)"(;%的*ZMM))培养))I9培养结束后!成熟的卵母细胞$/B2进行孤雌激活和以胎儿成纤维细胞为核供体重构胚胎!分别于)#和!))I观察胚胎发育情况!统计卵裂率和囊胚率及囊胚(%’细胞胚比率9结果如下,$!%随着*ZMM))添加浓度的增加!退化的卵母细胞增多!)"(;*ZMM))处理的退化卵显著!卵母细胞成熟率显著下降9$%%成熟培养$/B2液添加%"和)"(;*ZMM))处理的孤雌激活胚胎的囊胚形成率和%’细胞胚发育到囊胚的比率$/B2显著增加$7$"9"$%9$(%以对照组$"

3、(;*ZMM))%和%"(;*ZMM))处理的卵母细胞为$/B2$/B2胞质受体!发现%"(;*ZMM))处理的克隆胚的发育能力囊胚率和%’细胞胚发育到囊胚的比率$/B2有所提高!但无显著差异$7’"9"$%9以上结果表明!猪卵母细胞体外成熟过程中添加*ZMM))提高了猪卵母细胞体外成熟的胞质质量!胚胎的发育能力提高9关键词!!促减数分裂甾醇!猪!卵母细胞体外成熟!胚胎发育!!现代繁殖生物技术如体外受精%体细胞克隆及物合成途径中的中间代谢物9<<’@*H由羊毛甾醇转基因技术的成功实施需要一个充足的卵母细胞的!)&脱甲

4、基酶",ZE$!$催化羊毛甾醇转化而来!而供应保障!这一需求不仅体现在数量上!更取决于>’@*H则是在甾醇8!)’还原酶"8!)’HY$的作用下卵母细胞的质量上9然而目前的状况不容乐观!现由<<’@*H代谢产生9*ZMM))’*’+则是8!)’HY有的猪卵母细胞体外培养体系虽可供应大量的卵母的抑制剂!它能够促进<<’@*H的累积9细胞但远不及体内的质量9因此建立一套良好的培现有的研究已证实<<’@*H可诱导猪卵母细胞*)+养体系来满足生产及研究就显得十分必要!它将极体外减数分裂的恢复!但能否提高猪卵母细胞体大提高猪胚

5、胎体外生产效率9*$+外成熟的胞质质量!仅见相关报道研究猪卵母细促减数分裂甾醇"/41BD1D’0861P0617AD64QB2D!胞体外成熟添加<<’@*H对体外受多精受精和原核@*H$是近年来被发现能促进卵母细胞体外减数分形成的影响9本研究利用@*H合成代谢过程中的*!+*%+*(+裂恢复的物质!目前对小鼠%大鼠%人及抑制剂*ZMM))累积<<’@*H!以成熟卵母细胞孤*)!$+猪已进行了相关的研究9@*H包括从卵泡液提雌激活胚和克隆胚的囊胚发育率作为检测胞质成熟取的<<’@*H及睾丸的>’@*H!它们是胆固醇生

6、质量的指标!间接地研究了内源性<<’@*H对猪卵!%""&’!!’%"收稿!%""&’!%’!!收修改稿!"国家科技攻关计划"批准号#%"")-*+!+-$和科技部社会公益重点项目"批准号#%""$L[*)""(&$资助!""通信作者!.’/012#RD6$"#!D17098B/!第!"卷!第#期!$%%"年#月#%(母细胞体外成熟的质量影响9!"$!卵母细胞孤雌激活取上述脱去卵丘的@’卵母细胞!用激活液洗!!材料与方法涤(遍9再将卵母细胞转移到已经铺满激活液%电极宽度为"9$//的融合槽中!电融合".,@%""!!

7、!"!!试剂->d$参数设定为!个!9#FO,8/!("$D的直流脉细胞和胚胎的培养器皿均购自<028B7-L公司(冲"L,$9电激活后!用],Hc%(T)/A,/;T$,$AL@.@和<-H购自K1:8B公司(其他试剂除特殊/;,-将卵母细胞洗涤(遍!洗涤后将卵母细胞转注明外均购自H1A/0公司9移到],Hc%(T)/A,/;T$,/;,-液滴内$A*ZMM))’*’+以!"//B2,;的浓度溶于L@H=(MW!$X,=%!!""X湿度培养()$I!然后再转配成储液9细胞培养液为添加!"X"体积比$胎牛血移到不含,

8、-的胚胎培养液中进行培养!分别于)#清的高糖L@.@"K1:8B$(细胞消化用"9%$X胰酶和!))I观察胚胎发育情况!统计卵裂率和囊胚率T"9"%X.L>*(抽卵液为?.E.H缓冲并添加了及囊胚,%’细胞胚比率9"9!X聚乙烯醇"EO*$的台氏液"EO*’>;’?.E.H$(卵母细胞体外成熟"[O@$液为无-H*的!"%!体细胞核移植],Hc