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《里氏木霉纤维素酶突变株选育的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、研究报告里氏木霉纤维素酶突变株选育的研究乌卜敏辰李剑芳复旦大学生物化学来无锡轻工大学食品学院一,‘〕,摘要以里氏木霉为出发菌株经紫外和亚料的固态发酵法其滤纸酶活和卜葡萄糖昔,硝基孤诱变处理后得到一株抗纤维二糖阻遏突变株,酶活分别为和葡萄糖一。一突变株的纤维素滤纸酶活提高了是一株很有应用价值的纤维素酶工业化生产,,一经过发酵条件优化后采用固体发醉。一,菌本文报导了以为出发菌株用筛选菌株发酵培养温度,其滤纸酶活和卜葡萄。抗降解物阻遏突变株法选育纤维素酶高产菌糖昔酶活分别为和葡萄糖。一种关锐词里氏木霉突变株纤维素酶材料和方法固体发酵
2、育种菌株引言本研究所用的出发菌株为里氏木霉一。目前纤维素酶的酶解效率,由无锡轻工大学中央不高远远比不。,,研究所酶工程实验室提供上淀粉酶因此影响纤了维素酶的工业化生产和广泛应用。要使纤维素得以充分分解和利原料及仪器、,一,,分析试剂无水葡萄糖二硝基水杨用就酶本身而言主要考虑两个方面一方酸、氢氧化钠、酒石酸钾钠、苯酚、醋酸钠、冰面是提高酶的活力另一方面由于纤维素酶是’·,、、〔幻醋酸无水亚硫酸钠水杨素降解纤维素生成葡葡糖的一组酶改善纤维及新华滤纸。,中素酶系各组分的相对含量可充分发挥它们之国杭州新华造纸厂间的协同作用。发酵原料稻
3、草秆或小麦秆和鼓皮粉碎、。近年来,通过大量的诱变育种工作后过目筛硫酸按等及发酵,,、、条件的优化纤维素酶活力不断提高出现许仪器恒温培养箱高压灭菌锅超净工,一‘,、、、〔〕多产酶活力高的菌株纤维素水解产物对作台型分光光度计恒温水浴锅分析天,、一、。酶有抑制作用其中纤维二糖是抑制纤维素酶平酸度计具塞试管等水解作用的主要产物抑制剂。许多研究者在改培养基进纤维素酶系组成方面作了大量工作以提高件平皿粗筛培养基母液、微晶葡萄糖昔酶,有人采用不同菌株的液态纤维素,纤维二糖一,微量元素液,琼活性,,,混合发酵技术生产纤维素酶改进了纤维素酶脂自
4、然加入脱氧胆酸钠抑制木霉菌的’〕,,。系组成,或在木霉纤维素酶中补加曲酶的民扩散生长便于菌落分离其中’母液葡萄糖昔酶,极大地提高了纤维素酶的降解能磷酸,柠檬酸钠,硝酸钠二氢钾,。。,,,力〕二水氯化钙一七水硫酸镁用我们应用常规筛选方法得到了一株具有高蒸馏水定容至。一,,纤维素酶活的里氏木霉菌株其具有与微量元素液浓度盐酸硫酸亚,,,,国内外木霉优良菌株相近的产纤维素酶能力铁氯化锌一水硫酸锰鲍六水,,。各葡萄昔酶活性较高采用以纤维素为主要原氯化钻鲍用蒸馏水定容至里氏木霉纤维素酶突变株选育的研究乌砖敏辰李剑芳—,,斜面培养基醋酸纤维
5、素钠硫酸钱滤纸酶活力定义以滤纸为底物在反应,酵母膏,琼脂,自然。条件℃,,,恒温下,以水解反,固体发酵培养基稻草秆或小麦秆鲍数应中每催化纤维素水解形成葡萄,,,。。皮硫酸钱加水自然糖的酶量为一个单位,诱变方法葡萄糖昔酶活力定义以水杨素为底物在单抱子悬浮液的制备取刚成熟的新鲜抱,,,以反应条件℃恒温下子于盛有玻璃珠和醋酸缓冲液的三角水解反应中每催化水杨素水解形成,,,瓶中振荡用无菌脱脂棉过滤滤液用葡萄糖的酶量为一个单位。血球计数板计数后,调整抱子数为护个,酶活计算公式为备用。酶活单位紫外诱变取单抱子悬浮液于无菌平,,式中一由标准
6、曲线查得的葡萄毫克数皿中于紫外灯下处照射一稀释倍数一酶液毫升数取致死率”以,上的涂布于粗筛平皿挑取形一恒温时间成清晰透明圈的菌株复筛。结果与讨论亚硝基肌诱变用分析天平称取固体一,,菌株选育图谱加丙酮溶解后再加无菌一,,以此为母液配制不本研究以里氏木霉出发菌株采醋酸缓冲液,,用紫外和处理获得了一株抗纤维二糖同浓度的溶液于支试管中各加入一,。,突变株其选育图谱见图单抱子悬液再分别加入,,溶液各摇匀℃静置大量稀释终止一葡萄糖反应,测定各剂量的致死率,选致死率左去一右的涂布于粗筛平皿。葡萄糖··‘’告晦液制备及酶活力浏定方法一葡萄糖滤
7、纸酶活力测定告于具塞试管和中加缓冲液一葡萄糖,火,℃分别加入滤纸片一张一图里氏木霉突变株选育图谱预热一后在管中加入适一当浓度使测定吸光度在之间的酶紫外诱变结果一液,℃保温,取将的单抱子悬液在紫外灯出各加试,,,下处照射的抱子悬液涂布于含齐管中补加酶液煮沸冷却。,纤维二糖的粗筛平板挑取能形成明显透明后加水摇匀处测定光密度管为,。,圈的菌株复筛结果见表其中号菌株产空白对照并从葡萄糖标准曲线上查出相应的,比一,葡萄糖含量折算成酶单位葡萄糖或酶较高出发株高作为再次,一。。诱变的出发株编号一各葡萄糖普酶活力测定诱变结果于具塞试管中加入水
8、杨素溶液将处理量为处理时间‘,,一的单抱子悬液涂布于含预热一后加入纤维,适当浓度使测定吸光度在之间的二糖的粗筛平板挑取约个菌落进行复,,。,。酶液℃保温其它同筛结果见表其中号菌株产酶较高提,一。酶活力单位定义与计算高编号中国酿造年第期,。一特点这对工业化生产是有利的表紫外诱变
